抑制AQP1表達對Balb-c 3T3成纖維細胞凋亡的影響.pdf

1、目的 水的跨膜轉(zhuǎn)運對維持細胞的正常代謝具有重要作用。1992年以來大量研究證實機體內(nèi)廣泛存在著特異性的水通道蛋白家族(Aquaporins，AQPs)。 AQP1在體內(nèi)扮演著重要角色，參與滲透壓驅(qū)動下的水的轉(zhuǎn)運，介導(dǎo)藥理作用，和參與水腫的形成等。但AQP1與凋亡之間是否存在著聯(lián)系，現(xiàn)在還有爭議。本實驗應(yīng)用特異性靶向AQP1表達基因的siRNA(short interfering RNA)，抑制小鼠Balb/c 3T3成纖維細胞的

2、AQP1的表達。并通過觀察α-溶血素對這種AQP1表達受抑制的細胞所造成的表型變化，初步探討AQP1在細胞凋亡中的作用。 方法 1、實驗分三組：normal cell組，為正常細胞； control—RNAi組，為非特異性靶向AQP1的siRNA轉(zhuǎn)染的細胞；AQP1-RNAi組，為特異性靶向AQP1的siRNA轉(zhuǎn)染的細胞。應(yīng)用α-溶血素(30ug/ml)作用于細胞，4h后觀察細胞的表型的變化。 2、western

3、 blot檢測AQP1蛋白量，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，流式細胞術(shù)檢驗細胞凋亡率。 結(jié)果 1、利用RNAi轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制成纖維細胞Balb/c3T3的AQP1表達，western blot驗證AQP1蛋白表達。AQP1-RNAi組AQP1表達較normalcell組減少60.55％，較control-RNAi組減少48.85％。 2、加入適量的α-溶血素(30ug/ml)，4h后流式細胞術(shù)檢測，觀察到norma

4、l cell組凋亡率為6.07％，control-RNAi組凋亡率為6.71％，AQP1-RNAi組凋亡率為9.76％。各組均出現(xiàn)亞二倍峰，凋亡率都較未加毒素時有所增加。且AQP1-RNAi組凋亡率，較正常細胞組增加3.69％，較control-RNAi組增加3.05％。倒置顯微鏡檢測，觀察到各組均出現(xiàn)凋亡相關(guān)的形態(tài)學(xué)變化，主要表現(xiàn)為細胞變圓、皺縮、反光增強，與臨近細胞分離，脫落。AQP1-RNAi組發(fā)生變化的細胞及脫落細胞的數(shù)目較其余