生存素對(duì)缺氧人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡與增殖的影響.pdf

1、缺氧性肺動(dòng)脈高壓(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)是呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)疾病，可導(dǎo)致右心衰竭，甚至死亡。迄今為止，HPH發(fā)病機(jī)制尚未完全闡釋清楚，肺血管重塑被認(rèn)為是HPH的主要病理特征，而肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)過(guò)度增殖和凋亡抑制是肺血管重塑的重要機(jī)制。當(dāng)前大多數(shù)治療肺動(dòng)脈高壓(pulmonary hypertension

2、，PH)的藥物主要集中在擴(kuò)張肺血管，然而對(duì)已經(jīng)發(fā)生肺血管重塑的患者來(lái)說(shuō)，降低肺動(dòng)脈壓的程度有限，且這種擴(kuò)血管作用對(duì)肺循環(huán)無(wú)特異性。因此，如何抑制PASMCs增殖促進(jìn)其凋亡是目前PH治療的熱點(diǎn)課題。
　　目前關(guān)于腫瘤細(xì)胞的過(guò)度增殖和凋亡受阻已經(jīng)有了較為詳盡的研究，值得借鑒。生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosisproteins，IAP)家族的新成員，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白，在人

3、類(lèi)多種惡性腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，具有抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖的雙重功能。近些年研究結(jié)果顯示，survivin參與PASMCs增殖凋亡失衡形成的肺血管重塑。我們前期的研究結(jié)果表明，survivin在慢性缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中高表達(dá)，且主要位于肺內(nèi)小動(dòng)脈的中膜。但survivin在缺氧人PASMCs(human PASMCs，HPASMCs)中是否表達(dá)國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究選用HPASMCs為研究對(duì)象，研究suvivin在

4、缺氧HPASMCs中的表達(dá)情況及survivin的小分子抑制劑YM155對(duì)HPASMCs增殖與凋亡的影響。將HPASMCs進(jìn)行常氧或缺氧24 h培養(yǎng)并將其分為6組:①常氧對(duì)照組（N組）;②24 h缺氧組（H組）;③常氧+YM15510nM組(NY組);④24 h缺氧+YM1551nM組(HY1組);⑤24 h缺氧+YM15510nM組(HY10組);⑥24 h缺氧+YM155100nM組(HY100組)。采用Western Blot的方

5、法檢測(cè)HPASMCs survivin蛋白表達(dá)，RT-PCR的方法檢測(cè)HPASMCs survivin mRNA表達(dá)。采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK-8)法檢測(cè)HPASMCs增殖，原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)HPASMCs凋亡。
　　研究發(fā)現(xiàn)N組未見(jiàn)survivin蛋白(0.016±0.006)和mRNA(1)表達(dá)，H組可見(jiàn)survivin蛋白(0.837±0.027)、survivin mRNA(17086±1044)表達(dá)。各

6、劑量(1nM、10nM、100nM)YM155干預(yù)組survivin蛋白、survivinmRNA含量分別為0.382±0.041、0.281±0.025、0.021±0.002、8074±2135、5614±709、1382±347，較H組顯著降低（q值分別為20.26、24.77、36.36、8.59、11.14、15，53，均P＜0.05），且在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。N組細(xì)胞增殖活性（以CCK-8法檢測(cè)出的A值表示）和細(xì)胞凋亡

7、率分別為0.988±0.071、2.683±1.360，與H組（1.438±0.121、0.612±0.500）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q值分別為6.484、3.532，均P＜0.05)。各劑量(1nM、10nM、100nM) YM155干預(yù)組細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞凋亡率分別為1.318±0.067、1.168±0.071、0.845±0.129、5.517±1.711、6.658±1.487、7.972±1.934，與H組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義（q值分別為2.581、3.980、8.733、6.014、7、413、9.023，均P＜0.05），且在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。
　　上述結(jié)果證實(shí)survivin在缺氧(2.5％ O2)HPASMCs中表達(dá)，而在常氧(21％ O2) HPASMCs中不表達(dá)。Survivin的小分子抑制劑YM155可以在基因和蛋白水平下調(diào)缺氧HPAMCs中表達(dá)的survivin，且呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。YM155抑制缺氧性HPASMCs增殖，促進(jìn)其