缺氧、衰老和內(nèi)毒素對大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)的影響.pdf

1、目的:血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及表型轉(zhuǎn)化在肺動脈高壓、高血壓、動脈粥樣硬化及冠狀動脈成形術(shù)后再狹窄等的形成過程中具有重要作用,而衰老、缺氧及內(nèi)毒素分別是疾病發(fā)生的獨(dú)立危險因素.該實(shí)驗(yàn)探討衰老、缺氧及內(nèi)毒素對體外培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細(xì)胞(Pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMC)的影響,特別是對PASMC的增殖、轉(zhuǎn)化、c-fos和c

2、-jun原癌基因的影響,并嘗試用D-半乳糖刺激青年P(guān)ASMC建立衰老PASMC模型,為進(jìn)一步在細(xì)胞水平研究人類衰老自然過程及病理過程的機(jī)理提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).結(jié)論:1、同青年大鼠的PASMC相比,老年大鼠分離培養(yǎng)的PASMC在體外有更高的增殖水平,更多的細(xì)胞由收縮型轉(zhuǎn)化為增殖型,細(xì)胞大體形態(tài)和細(xì)胞骨架無明顯差異;c-fos mRNA水平和c-fos蛋白表達(dá)也相應(yīng)增加,說明c-fos同平滑肌細(xì)胞的衰老有密切關(guān)系;c-jun mRNA水平和

3、c-jun蛋白兩者相比并無統(tǒng)計學(xué)意義,說明c-jun在平滑肌細(xì)胞衰老的進(jìn)程中的作用還值得進(jìn)一步商討.說明老年P(guān)ASMC本身就具有較高的增殖水平,且比較容易由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化.2、短時間的缺氧刺激(6小時內(nèi))對細(xì)胞生長有抑制作用,6小時后能直接刺激PASMC增殖加速,并使細(xì)胞的SM-α-actin減少,細(xì)胞由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化增加;c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達(dá)也相應(yīng)增加,從分子水平說明了缺氧引起細(xì)

4、胞增殖水平增加;老年細(xì)胞受缺氧刺激敏感,增殖最快,細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化比例也最大.提示在慢性阻塞性肺疾病中,缺氧本身就是一個刺激PASMC增生和轉(zhuǎn)化的重要因素.3、短時間的內(nèi)毒素刺激(12小時內(nèi))對細(xì)胞生長有抑制作用,然而在適當(dāng)濃度內(nèi)毒素刺激下,PASMC 12小時后增殖速度加快,轉(zhuǎn)化為增殖型的細(xì)胞明顯增加,c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達(dá)也增加,從分子水平說明內(nèi)毒素刺激也可以引起細(xì)胞增殖水平增加.同樣,老年

5、細(xì)胞受內(nèi)毒素刺激后,增殖最為明顯,由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化也較多.這些變化在一定程度上證實(shí)和解釋了肺部感染或全身感染后肺動脈或其它血管平滑肌的增殖現(xiàn)象.4、用一定濃度的D-半乳糖刺激青年大鼠的PASMC,大體觀察和細(xì)胞骨架的染色檢測無明顯區(qū)別,生長曲線與細(xì)胞內(nèi)SM-α-actin水平都比較接近老年大鼠分離培養(yǎng)的PASMC,而且c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達(dá)水平也比較接近.D-葡萄糖處理的對照組未出現(xiàn)上述