B細胞活化因子與炎癥性腸病的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的：
　　炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）是一種病因尚不明確的腸道慢性炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）和克羅恩?。–rohn's disease，CD）。IBD的發(fā)病率近年來一直呈上升趨勢，其病程遷延反復(fù)，難以徹底治愈，嚴重影響患者的生活質(zhì)量甚至威脅患者的生命健康。目前IBD的診斷主要基于臨床表現(xiàn)、內(nèi)鏡、組織學、放射學以及基因檢測等資料，侵

2、入性及昂貴的檢查手段常給患者帶來身心負擔。近年來，IBD相關(guān)的生物標記物檢測因無創(chuàng)、操作簡單、易被患者接受等特點而受到國內(nèi)外學者的關(guān)注。尋找有效的生物標記物，為IBD的早期診斷、有效治療及疾病進展評估提供更準確的依據(jù)已成為醫(yī)學領(lǐng)域面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。
　　在發(fā)病機制上目前認為 IBD是感染、環(huán)境等因素觸發(fā)了遺傳易感個體異常的腸道粘膜免疫反應(yīng)，導致腸道持續(xù)的炎癥和組織損傷。研究證實CD4+Th1/Th2/Th17細胞亞群失衡與 IBD的

3、發(fā)生密切相關(guān)。此外，IBD中存在針對腸道正常菌群及自身抗原失去免疫耐受，產(chǎn)生過強的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生自身抗體，介導組織損傷。異常活化和分化的B細胞在這一過程中可能發(fā)揮重要的作用，進而參與IBD的發(fā)生發(fā)展。
　　B細胞活化因子（B cell activating factor，BAFF)是腫瘤壞死因子超家族（tumor necrosis factor super family, TNFSF）的成員之一，是B細胞分化、發(fā)育、成熟和穩(wěn)定的重

4、要調(diào)節(jié)因子。BAFF通過與其受體結(jié)合，提供B細胞生存信號，促進生發(fā)中心形成和抗體類別轉(zhuǎn)換。BAFF的過表達時則可刺激外周B細胞增殖分化，使自身反應(yīng)性 B細胞逃逸凋亡信號,促進漿細胞的存活,導致機體免疫耐受狀態(tài)的破壞。除了是 B細胞的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,BAFF在T細胞共刺激方面亦發(fā)揮重要作用。研究報道BAFF在多種慢性炎癥性疾病中表達異常增多，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等，并且部分患者病情和血清BAFF水平相關(guān)。然而BAFF

5、在IBD中的表達情況尚不明確。
　　在本研究中，我們試圖分析BAFF及其受體在IBD不同組群中的表達差異及其與臨床特征的相關(guān)性，探索BAFF作為IBD生物標記物的潛在臨床價值，深化我們對BAFF在IBD發(fā)病機制中作用和地位的認識，為IBD的臨床治療提供一定的思路和理論依據(jù)。
　　方法
　　1.收集明確診斷為UC的患者78例、CD患者37例，腸易激綜合征患者12例，健康對照44人，采集外周靜脈血、腸道活檢標本（IBD患者

6、腸道標本包括炎癥部位和非炎癥部位）和糞便標本。ELISA法檢測血清及糞便 BAFF的表達水平。實時定量PCR、Western blot和免疫熒光法檢測腸道組織BAFF的基因和蛋白表達水平。應(yīng)用Bio-plex高通量平臺測定血清炎癥細胞因子的含量。
　　2.建立葡聚糖硫酸鈉誘導的實驗性結(jié)腸炎模型。C57BL/6小鼠16只，隨機分為慢性腸炎組（n=8）：小鼠自由飲用3％ DSS溶液7天，然后改為飲用正常水10天，此為一個周期，共4個周

7、期；正常對照組(n=8)：自由飲相應(yīng)天數(shù)正常水。每天記錄小鼠的體重、糞便、活動和精神狀態(tài)等一般情況，通過疾病活動評分、結(jié)腸組織大體形態(tài)、結(jié)腸長度及組織病理學評分進行模型評價。
　　3.通過實時定量PCR、Western blot和免疫熒光法檢測各組小鼠結(jié)腸組織BAFF的基因和蛋白表達水平。實時定量PCR法檢測小鼠結(jié)腸組織中BAFF三種受體（BCMA、TACI、BAFF-R)的mRNA表達。免疫熒光法檢測小鼠腸道組織B細胞數(shù)量改變。

8、ELISA法檢測各組小鼠血清和腸道粘液中IgA、IgG抗體的含量。
　　結(jié)果
　　1.數(shù)據(jù)以中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示。CD患者血清 BAFF水平為1430（1105-1624) pg/ml, UC組為1472(1018-1772) pg/ml，均較正常對照組（977(482-1345) pg/ml）顯著升高（P值分別為0.005和0.007）。活動期患者的血清BAFF水平較非活動期患者和正常對照組升高，差異具有統(tǒng)計學意義(

9、P值分別為0.046和0.001)。
　　2. UC患者血清BAFF水平與Mayo評分存在相關(guān)性(r=O．425，P=0．017)，且血清BAFF與hsCRP、TNF-α、IL-1β均顯著相關(guān)(r值分別為O．745、O．810、O．829，P值分別為＜0.001、0．015、0．042)。
　　3.受試者工作特征曲線（ROC）分析血清BAFF最佳截斷值為1414 pg/mL，敏感性和特異性分別為64%和93%，曲線下面積（A

10、UC）為0.797（95%可信區(qū)間：0.654-0.940）。
　　4.與健康組比較，BAFF在UC和CD患者結(jié)腸組織中表達均增高，差異有統(tǒng)計學意義(實時定量PCR結(jié)果：P值分別為0.003和0.045，Westernblot結(jié)果：P值分別為0.005和0.028)，免疫熒光結(jié)果顯示BAFF在腸道固有層有表達，且表達明顯增加。
　　5. CD患者糞便BAFF水平為369(326-493) pg/ml,UC組為542(358-

11、1758) pg/ml，均較IBS組（294(287-299) pg/ml）和正常對照組（295(284-309) pg/ml）顯著增加（P值均＜0.001）?；顒悠赨C患者的糞便BAFF水平高于非活動期UC組，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.033)。非活動期IBD患者的糞便BAFF水平顯著高于IBS和正常對照(P＜0.01)。
　　6. ROC曲線分析糞便BAFF最佳截斷值為325pg/mL，敏感性和特異性分別為90%和96

12、%，AUC為0.936（95%可信區(qū)間：0.868-1）。
　　7.成功建立結(jié)腸炎模型，與對照組比較，DSS組小鼠結(jié)腸中 BAFF的表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(實時定量PCR結(jié)果：P=0．033，Western blot結(jié)果：P=O．024)；其受體BCMA mRNA水平較正常對照組增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.04），而TACI和BAFF-R的表達無明顯改變（P＞0.05）。
　　8. DSS模型組結(jié)腸B細胞浸潤數(shù)量明

13、顯增加；血清IgA、IgG抗體水平顯著升高（P值分別為0.019和0.028）；腸道粘液IgA、IgG水平升高，與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P值分別為0.03和0.012）。
　　結(jié)論
　　BAFF在IBD患者血清、結(jié)腸組織及糞便中表達增加，可能參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。血清BAFF與UC疾病活動度相關(guān)，具有評估患者疾病嚴重程度的潛能。糞便BAFF是較為理想的IBD生物學標志物，其診斷效能優(yōu)于血清BAFF。DSS介導的慢性