2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   1.分析MXC及其代謝產(chǎn)物HPTE是否可以通過抑制3β-HSD與17β-HSD3而影響人與大鼠睪丸中雄激素的合成,并分析抑制作用的發(fā)生機(jī)制。
   2.建立同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中MXC及其代謝產(chǎn)物HPTE濃度的HPLC方法。
   3.用建立的方法研究MXC及HPTE在大鼠體內(nèi)的毒物代謝動(dòng)力學(xué)。
   方法:
   (一)MXC和HPTE對(duì)人與大鼠睪丸中3β-HSD及17β-HSD3抑制

2、作用的研究實(shí)驗(yàn)
   用CO2窒息法處死大鼠,取出睪丸,用玻璃勻漿器進(jìn)行勻漿,制備微粒體,以Bio-Rad蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。(人睪丸微粒體為成品)。
   1.在睪丸微粒體蛋白,NAD+,底物([3H]-PREG和無標(biāo)記PREG的混合物)等物質(zhì)的配比濃度都不變的情況下加入不同濃度的MXC或HPTE進(jìn)行反應(yīng)以測(cè)定MXC或HPTE對(duì)3β-HSD的半數(shù)抑制濃度;在睪丸微粒體蛋白,NADPH,底物([3H]-DION

3、E和無標(biāo)記DIONE的混合物)等物質(zhì)的配比濃度都不變的情況下加入不同濃度的MXC或HPTE進(jìn)行反應(yīng)以測(cè)定MXC或HPTE對(duì)17β-HSD3的半數(shù)抑制濃度。
   2.在睪丸微粒體蛋白,NAD+,MXC或HPTE等物質(zhì)的配比濃度都不變的情況下加入不同濃度的底物([3H]-PREG和無標(biāo)記PREG的混合物)進(jìn)行反應(yīng),以測(cè)定MXC或HPTE對(duì)3β-HSD的抑制模式;在睪丸微粒體蛋白,NADPH,MXC或HPTE等物質(zhì)的配比濃度都不變的

4、情況下加入不同濃度的底物([3H]-DIONE和無標(biāo)記DIONE的混合物)進(jìn)行反應(yīng),以測(cè)定MXC或HPTE對(duì)17β-HSD3的抑制模式。
   3.在睪丸微粒體蛋白,底物([3H]-PREG和無標(biāo)記PREG的混合物),MXC或HPTE等物質(zhì)的配比濃度都不變的情況下加入不同濃度的NAD+進(jìn)行反應(yīng)以確定MXC或HPTE對(duì)3β-HSD的抑制模式是否是通過與NAD+競爭而實(shí)現(xiàn);在睪丸微粒體蛋白,底物([3H]-DIONE和無標(biāo)記DION

5、E的混合物),MXC或HPTE等物質(zhì)的配比濃度都不變的情況下加入不同濃度的NADPH進(jìn)行反應(yīng)以確定MXC或HPTE對(duì)17β-HSD3的抑制模式是否是通過與NADPH競爭而實(shí)現(xiàn)。
   到反應(yīng)時(shí)間后,加入2ml冰乙醚終止反應(yīng),使用薄層色譜分離法分離類固醇,并用放射掃描儀測(cè)定放射性,用P4放射性計(jì)數(shù)與總計(jì)數(shù)(實(shí)驗(yàn)開始時(shí)加入的[3H]-PREG的放射性計(jì)數(shù))的比,來計(jì)算PREG轉(zhuǎn)化為P4的百分率;用T的放射性計(jì)數(shù)與總計(jì)數(shù)(實(shí)驗(yàn)開始時(shí)加

6、入的[3H]-DIONE的放射性計(jì)數(shù))的比來計(jì)算DIONE轉(zhuǎn)化為T的百分率。
   (二)建立同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中MXC及其代謝產(chǎn)物HPTE濃度的HPLC方法
   高效液相色譜儀Agilent1100系列;色譜柱為AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6mmx150mm5μm);流動(dòng)相為A:H20,B:乙腈;二元梯度洗脫程序:0min時(shí)A:B(55:45),6min時(shí)A:B(15:85),8min時(shí)

7、A:B(55:45),流速1.0ml·min-1;紫外檢測(cè)波長:240nm;柱溫:30℃。
   (三)MXC及HPTE在大鼠體內(nèi)的毒物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
   取8只雄性SD大鼠,灌胃給藥(MXC,500mg·kg-1)染毒后,于不同時(shí)間點(diǎn)收集血液樣本。采用建立的HPLC法測(cè)定大鼠血漿中MXC和HPTE的含量,用DAS2.0程序處理數(shù)據(jù),計(jì)算毒物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
   結(jié)果:
   (一)MXC和HPTE對(duì)

8、人與大鼠睪丸中3β-HSD及17β-HSD3抑制作用的研究實(shí)驗(yàn)
   1.MXC和HPTE對(duì)人的3β-HSD有效抑制濃度為10nM。MXC抑制3β-HSD的IC50為53.21±15.52μM(人)和46.15±17.94μM(大鼠),HPTE對(duì)其抑制的IC50為8.29±2.49μM(人)和13.82±2.26μM(大鼠)。MXC達(dá)到100μM時(shí),對(duì)人和大鼠的17β-HSD3活性沒有影響。而HPTE抑制17β-HSD3的IC5

9、0是12.1±1.9μM(人)和32.0±8.6μM(大鼠)。
   2.MXC和HPTE對(duì)3β-HSD的作用方式并非與底物孕烯醇酮相互競爭,而是與輔酶因子NAD+競爭。HPTE抑制17β-HSD3的作用方式不是與底物雄烯二酮競爭,而是與輔酶因子NADPH相互競爭。
   (二)同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中MXC及其代謝產(chǎn)物HPTE濃度的HPLC方法
   血漿中MXC、HPTE和內(nèi)標(biāo)物氯硝西泮出峰干凈利落,峰形良好,分離

10、完全,無雜質(zhì)峰干擾。MXC、HPTE和氯硝西泮留時(shí)間分別為8.19,4.26和3.34min.MXC在(0.06-12)mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998),HPTE在(0.06-3)mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9997)。血漿MXC及HPTE的定量下限均為0.06mg·L-1。平均相對(duì)回收率跟平均絕對(duì)回收率均在85%以上;日內(nèi)精密度RSD小于5%,日間精密度RSD小于15%,可用于MXC及HPTE的毒動(dòng)學(xué)研究

11、。
   (三)MXC及HPTE在大鼠體內(nèi)的毒物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
   甲氧滴滴涕的毒動(dòng)學(xué)參數(shù):Cmax為(5.52±1.21)mg·L-1;t1/2α為(4.12±1.21)h:t1/2β為(22.54±6.31)h;AUC(0-t)為(65.97±17.94)mg·h-1·L-1;AUC(0-∞)為(69.06±18.61)mg·h-1·L-1;CL為(7.94±2.31)L·h-1·kg-1;V為(66.16±20.

12、21)L·kg-1。
   HPTE的毒動(dòng)學(xué)參數(shù):Cmax為(1.32±0.37)mg·L-1;t1/2。為(3.13±0.91)h:t1/2β為(31.12±10.91)h;AUC(0-t)為(14.69±2.99)mg·h·L-1:AUC(0-∞)為(17.23±3.66)mg·h-1·L-1;CL為(30.14±6.09)L·h-1·kg-1;V為(232.55±36.44)L·kg-1。
   結(jié)論:
  

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