何首烏飲對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD的影響.pdf

1、運(yùn)動(dòng)性低血睪酮是影響運(yùn)動(dòng)能力和運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)體力的重要因素之一,對(duì)體育運(yùn)動(dòng)員的體力增強(qiáng)和恢復(fù)很重要。運(yùn)動(dòng)性低血睪酮長(zhǎng)期以來(lái)一直備受關(guān)注,因此運(yùn)動(dòng)性低血睪酮成為運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)領(lǐng)域。而何首烏飲由《宣明論方》何首烏丸加味而成,在何首烏、肉從蓉、懷牛膝基礎(chǔ)上增加淫羊藿補(bǔ)腎助陽(yáng)以強(qiáng)筋骨,丹參活血化瘀以通心脈,茯苓健脾利濕以寧心神。有文獻(xiàn)報(bào)道何首烏飲能夠提高大鼠血清睪酮含量和SOD活性、恢復(fù)下丘腦單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的平衡、降低生精細(xì)胞凋亡指數(shù)等。3β

2、-HSD分子量為43 kd具有Ⅰ型和Ⅱ型兩種類(lèi)型其中Ⅱ型主要存在于睪丸,3β-HSD在類(lèi)固醇激素的合成中將孕烯醇酮轉(zhuǎn)化為孕酮,后者經(jīng)羥化、側(cè)鏈裂解形成睪酮,它是睪酮合成的關(guān)鍵酶之一,是評(píng)價(jià)睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能的經(jīng)典指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠施行高強(qiáng)度力竭游泳訓(xùn)練,并進(jìn)行何首烏飲灌胃預(yù)防、治療、干預(yù),從生化-組織-蛋白-基因水平等不同層次探討何首烏飲對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD表達(dá)的影響。
　　 目的:
　　 研究何首烏飲對(duì)過(guò)度

3、訓(xùn)練雄性大鼠睪丸睪酮分泌的影響,3β-HSD在睪丸組織免疫組織化學(xué)法染色和mRNA基因表達(dá),以及在睪丸組織中的蛋白表達(dá)。用以探討何首烏飲對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD的影響。
　　 方法:
　　 1疲勞模型建立及分組:
　　 選用8周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats,SD)75只,動(dòng)物(合格證編號(hào)1005050)每只體重為180-200g,自由進(jìn)食,飲水,室溫20℃-25℃,相對(duì)濕

4、度45％-55％,每天光照12h,隨機(jī)分為5組:安靜對(duì)照組(A組)、安靜何首烏飲組(B組)、自然恢復(fù)組(C組)、何首烏飲治療組(D組)和何首烏飲預(yù)防組(E組),每組15只。自然恢復(fù)組和何首烏飲治療組可以看作模型組,C組、D和E組大鼠復(fù)制力竭運(yùn)動(dòng)動(dòng)物模型,其中的E組每天訓(xùn)練前給何首烏飲20g／kg／d(含生藥9.6g／ml)灌胃作為預(yù)防,安靜對(duì)照組(A組)灌胃生理鹽水,安靜何首烏飲組灌胃何首烏飲。模型成功后各組停訓(xùn),何首烏飲治療組給何首烏

5、飲20g／kg／d(含生藥9.6g／ml)灌胃治療42d,自然恢復(fù)組灌胃生理鹽水,安靜何首烏飲組繼續(xù)灌注何首烏飲。何首烏飲預(yù)防組停止灌胃,自由飲食。安靜對(duì)照組繼續(xù)灌胃生理鹽水。
　　 2方法
　　 (1)判斷疲勞模型是否建立成功:在游泳訓(xùn)練42 d后大鼠用10％水合氯醛麻醉,經(jīng)內(nèi)眥眶后靜脈取血約1.5 mL,離心取上清。當(dāng)大鼠出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)遲緩,體重下降,食量減少等現(xiàn)象。同時(shí)將睪酮降低作為判斷疲勞成功的重要指標(biāo),血紅蛋白和血肌

6、酐作為輔助的判斷指標(biāo),分別采用生化分析儀檢測(cè)全血血紅蛋白和血清肌酐含量以及血清睪酮含量,血清睪酮含量明顯低于正常組,以及血紅蛋白低于正常組和血肌酐升高并且明顯高于正常組,通過(guò)以上生化指標(biāo)和大鼠的外部特征可以確定造模成功。
　　 (2)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠睪丸組織間質(zhì)細(xì)胞3β-HSD表達(dá)情況。
　　 (3)Western Blot法檢測(cè)各組大鼠睪丸組織3β-HSD蛋白的表達(dá)。
　　 (4)RT-PCR檢測(cè)各組

7、大鼠睪丸組織3β-HSD mRNA的基因表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組化染色:各組切片均可見(jiàn)3β-HSD染色,免疫陽(yáng)性細(xì)胞主要是睪丸間質(zhì)細(xì)胞。免疫陽(yáng)性產(chǎn)物位于細(xì)胞間質(zhì),通常呈棕黃色顆粒狀,小部分呈彌散狀。3β-HSD在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中為深黃色顆粒為陽(yáng)性表現(xiàn),與安靜組比較何首烏飲組表達(dá)陽(yáng)性最強(qiáng),有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)而自然恢復(fù)組表達(dá)最弱,治療組和預(yù)防組強(qiáng)于自然恢復(fù)組,有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

8、r>　　 2 Western Blot檢測(cè)睪丸組織蛋白的表達(dá):安靜何首烏飲組大鼠睪丸3β-HSD蛋白表達(dá)明顯高于安靜對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),何首烏飲治療組3β-HSD蛋白表達(dá)高于自然恢復(fù)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),何首烏飲預(yù)防組3β-HSD蛋白表達(dá)高于自然恢復(fù)組(P<0.05),治療組和預(yù)防組之間無(wú)顯著性差異。
　　 3 RT-PCR檢測(cè)睪丸組織3β-HSD mRNA的表達(dá):與安靜組相比,3β-