甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的毒性作用.pdf

1、甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)是一種替代滴滴涕的有機(jī)氯殺蟲劑，因其殺蟲效果明顯，生物毒性相對(duì)較低，在許多國(guó)家得到廣泛應(yīng)用。但由于大規(guī)模的使用，加之甲氧滴滴涕所具有難降解性、生物聚積性和沿食物鏈傳遞的特性，使其所造成的環(huán)境污染已遍及全球生態(tài)系統(tǒng)。在土壤、河流、動(dòng)植物體內(nèi)、人體體液、甚至孕婦血液、胎盤、臍血、新生兒體內(nèi)、乳汁中都檢測(cè)到了甲氧滴滴涕。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)MXC具有不孕、流產(chǎn)、誘導(dǎo)卵泡閉鎖等生殖毒性。因此，研究MXC

2、對(duì)生殖細(xì)胞的影響具有重要意義。而有關(guān)MXC對(duì)體外卵母細(xì)胞成熟和受精及胚胎發(fā)育的影響的報(bào)道卻很少。我們的研究以昆明白小鼠未成熟卵母細(xì)胞為研究對(duì)象，采用體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)的方法研究不同劑量甲氧滴滴涕對(duì)卵母細(xì)胞成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的影響。
　　研究目的：1、研究MXC對(duì)小鼠未成熟卵母細(xì)胞體外成熟的毒性作用；2、研究MXC對(duì)小鼠成熟卵母細(xì)胞體外受精的毒性作用；3、研究MXC對(duì)小鼠早期胚胎發(fā)育的影響
　　第一部分

3、，甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的毒性作用
　　研究方法：1、超促排卵得到未成熟小鼠卵母細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組MXC濃度分別為7.25，14.5，29μg/mL；對(duì)照組直接用M2培養(yǎng)液培養(yǎng)，各組培養(yǎng)時(shí)間均為24h。培養(yǎng)過(guò)程中在倒置顯微鏡下觀察各組生發(fā)卵泡破裂(GVBD)和第一極體(PB1)的形成情況,出現(xiàn)PB1的卵母細(xì)胞視為核成熟（MⅡ期）。2、激光共聚焦觀察有絲分裂紡錘體的形成。3、將出現(xiàn)PB1的卵母細(xì)胞進(jìn)行熒光染色，觀察皮質(zhì)顆粒的分布

4、，判斷核成熟卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟情況。4、鏡下觀察MXC對(duì)卵丘擴(kuò)展的影響。
　　研究結(jié)果：1、培養(yǎng)24h時(shí)，甲氧滴滴涕各處理組與對(duì)照組卵母細(xì)胞GVBD發(fā)生率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；培養(yǎng)過(guò)程中GVBD發(fā)生實(shí)驗(yàn)組較同期對(duì)照組也沒(méi)有明顯延遲。但是成熟率卻從71.2％（對(duì)照組）逐漸降低至22％（29μg/mLMXC組），7.25μg/mLMXC組（52.8％）和14.5μg/mLMXC組（44.4％）與對(duì)照組比較差別也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、2、實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組MⅠ期紡錘體星體變小。3、MⅡ期卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒呈單層狀排布于細(xì)胞膜下的比例實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。MXC對(duì)核成熟的卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟影響不明顯。4、MXC能抑制卵丘擴(kuò)展，且隨著MXC濃度的升高，卵丘擴(kuò)展程度明顯減弱。
　　研究結(jié)論：1、甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞的毒性作用，通過(guò)抑制卵母細(xì)胞胞核成熟，使小鼠卵母細(xì)胞成熟率明顯下降，從而使母體的受孕能力下降，導(dǎo)致不孕。2、甲氧滴滴涕可直接作用于卵母細(xì)胞

6、，使卵母細(xì)胞有絲分裂紡錘體形成異常，從而抑制卵母細(xì)胞核的成熟。3、甲氧滴滴涕可能通過(guò)抑制卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展，來(lái)影響后續(xù)胚胎發(fā)育，造成流產(chǎn)等。但對(duì)皮質(zhì)顆粒的分布影響不明顯，即甲氧滴滴涕不能抑制核成熟卵母細(xì)胞的胞質(zhì)成熟。
　　第二部分，甲氧滴滴涕對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外受精和早期胚胎發(fā)育的影響
　　研究方法：1、將7.25和14.5μg/mLMXC組核成熟的小鼠卵母細(xì)胞行體外受精，觀察卵母細(xì)胞的受精能力。2、將受精卵吸出培養(yǎng)，每日在顯微鏡

7、下觀察胚胎發(fā)育情況，分析受精卵的2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率、8-細(xì)胞形成率、桑椹胚率、囊胚率和胚胎孵化率。3、選擇形態(tài)較好的囊胚進(jìn)行胚胎細(xì)胞染色計(jì)數(shù)。
　　研究結(jié)果：1、7.25μg/mLMXC組與對(duì)照組小鼠受精卵的受精率，2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率、8-細(xì)胞形成率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；14.5μg/mLMXC組與對(duì)照組小鼠卵母細(xì)胞的受精率，2-細(xì)胞形成率、4-細(xì)胞形成率差別不明顯，但8-細(xì)胞期形成率在兩組間差