臭氧關(guān)節(jié)腔注射對CIA大鼠療效以及RANKL-OPG系統(tǒng)與趨化因子作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　觀察臭氧（03）關(guān)節(jié)腔注射對CIA模型大鼠的干預(yù)療效，并在血清水平探討臭氧關(guān)節(jié)腔注射之后，對CIA大鼠血清中參與骨代謝因子RANKL、OPG以及炎性趨化因子MCP-1、RANTES、CXCL10水平的影響，進(jìn)一步在組織和分子水平探討臭氧關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射對CIA大鼠骨破壞通路RANKL/OPG和其重要轉(zhuǎn)接蛋白TRAF6以及CXCL10/CXCR3趨化軸的影響。
　　方法：
　　將40只體重及鼠齡相當(dāng)?shù)腤istar

2、大鼠分為2組，正常組(8只)和造模組（32只），CII+CFA對造模組2次免疫，建立CIA大鼠模型，造模成功（24只）后隨機(jī)分為CIA組8只、O3組8只；MTX組8只。O3組雙踝關(guān)節(jié)內(nèi)注射濃度為40μg/ml的O3各1ml，每周1次，共注射3周。MTX組腹腔注射0.9mg/kg，每周1次，共3周。分別測量雙足腫脹度、評估關(guān)節(jié)炎指數(shù)和影像學(xué)評分對CIA大鼠療效評估。用高通量流式多因子檢測技術(shù)測定各組大鼠血清中子RANKL、OPG、MCP-

3、1、RANTES、CXCL10的水平。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測滑膜組織表達(dá)TRAF6和CXCR3水平；應(yīng)用RT-PCR方法檢測淋巴結(jié)、滑膜、脾臟組織中RANKL、OPG、TRAF6和CXCL10、CXCR3的mRNA表達(dá)水平；兩組間比較用t檢驗(yàn)或Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.臭氧關(guān)節(jié)腔注射對CIA大鼠的療效:
　　40ug/ml的臭氧關(guān)節(jié)腔注射之后足腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)和影像學(xué)評分明顯改善，提示臭氧關(guān)節(jié)腔注

4、射對CIA大鼠有明確的療效
　　2.對骨破壞系統(tǒng)的影響：
　　1）血清中RANKL、OPG、RANKL/OPG變化：
　　?RANKL和RANKL/OPG:CIA組與正常組相比明顯升高（P＜0.05），O3組與CIA組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），O3組同MTX組相比水平相當(dāng)（P＞0.05）。
　　?OPG水平:各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2）滑膜中TRAF6蛋白表達(dá)

5、r>　　CIA組滑膜細(xì)胞TRAF6蛋白表達(dá)強(qiáng)于正常組，MTX組和O3組TRAF6蛋白表達(dá)弱于與CIA組；O3組TRAF6蛋白表達(dá)弱于MTX組；
　　3）淋巴結(jié)、滑膜、脾臟中RANKL/OPG及TRAF6mRNA表達(dá)
　?、倭馨徒Y(jié)和滑膜中：RANKL/OPG比例和TRAF6:CIA組mRNA與正常組相比升高（P＜0.05）；O3組較CIA組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；O3組與MTX組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）

6、。
　?、谄⑴K中:CIA組TRAF6的mRNA表達(dá)較正常組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；O3組較CIA組明顯降低（P＜0.05）；O3組與MTX組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。RANKL/OPG比例各組間無明顯差異（P＞0.05）。
　　3.對趨化因子的影響：
　　1）血清中MCP-1、RANTES、CXCL10水平
　?、費(fèi)CP-1、RANTES:CIA組與正常組相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、（P＜0.05），O3組與CIA組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　②CXCL10：CIA組與正常組相比明顯升高（P＜0.05），O3組與CIA組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與MTX組相比水平相當(dāng)（P＞0.05）
　　2）滑膜中CXCR3蛋白表達(dá)
　　CIA組滑膜細(xì)胞CXCR3蛋白表達(dá)強(qiáng)于正常組，MTX組和O3組CXCR3蛋白表達(dá)弱于與CIA組；O3組CXCR3蛋白表達(dá)弱于MTX組
　　

8、3）淋巴結(jié)、滑膜、脾臟中CXCL10、CXCR3mRNA表達(dá)
　　①滑膜中:CIA組與正常組相比明顯升高（P＜0.05），O3組較與CIA組明顯降低（P＜0.05）。O3組與MTX組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）
　　②淋巴結(jié)和脾臟中O3組與CIA組無明顯差異（P＞0.05）
　　結(jié)論：
　　1.40ug/ml的臭氧關(guān)節(jié)腔注射之后可改善CIA大鼠關(guān)節(jié)癥狀，阻止骨破壞，療效顯著。
　　2.大鼠造模組中RAN

9、KL/OPG系統(tǒng)參與了其骨破壞的發(fā)生發(fā)展，其作用機(jī)制可能為下游信號通路轉(zhuǎn)接蛋白TRAF6上調(diào)而致RANKL/OPG比例上升。
　　3.臭氧關(guān)節(jié)腔治療對CIA大鼠骨破壞系統(tǒng)的作用，是通過減少下游信號通路轉(zhuǎn)接蛋白TRAF6的表達(dá)，糾正RANKL/OPG系統(tǒng)的失衡，減少破骨細(xì)胞的形成，減輕CIA大鼠的骨質(zhì)的破壞。其在關(guān)節(jié)局部作用效果優(yōu)于MTX全身治療；
　　4.在CIA大鼠免疫過程中存在CXCL10/CXCR3趨化軸的紊亂，在CI