唑來(lái)膦酸對(duì)多發(fā)性骨髓瘤成骨細(xì)胞增殖及其RANKL-OPG表達(dá)的作用研究.pdf

1、目的： (1)研究多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)向成骨細(xì)胞(OB)分化及其RANKL和OPG表達(dá)； (2)研究唑來(lái)膦酸對(duì)MM OB增殖及其RANKL和OPG表達(dá)的影響。 方法： 取MM患者骨髓液3-5 m1密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞層原代培養(yǎng)形成BMSCs，貼壁傳代后采用含有維生素C(50 mg/L)，地塞米松(10-8mol/L)，β-甘油磷酸鈉(10 mmol/L)的低糖DMEM

2、培養(yǎng)基將BMSCs誘導(dǎo)成OB，倒置相差顯微鏡觀察形態(tài)變化并用HE染色、瑞氏染色、堿性磷酸酶染色及VonKossa染色證實(shí)OB的存在；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)并比較MM患者與對(duì)照組OB的RANKL和OPG mRNA表達(dá)水平。采用不同濃度唑來(lái)膦酸處理培養(yǎng)的OB，分別作用24 h、48 h和72 h后，通過(guò) (1)細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測(cè)OB增殖； (2)RT-PCR檢測(cè)OB RANKL和OPG m

3、RNA表達(dá)：和 (3)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中sRANKL和OPG濃度來(lái)考察唑來(lái)膦酸的作用。 結(jié)果： (1)MM患者BMSCs在條件培養(yǎng)基中誘導(dǎo)分化，形成的細(xì)胞具備OB形態(tài)學(xué)特征，ALP染色陽(yáng)性，能形成鈣結(jié)節(jié)。 (2)MM患者OB RANKLmRNA表達(dá)高于對(duì)照組，與GAPDH的灰度比分別是0.72±0.02和0.65±0.01(P<0.05)；OPG mRNA表達(dá)低于對(duì)照組

4、，與GAPDH的灰度比分別是0.43±0.02和0.49±0.01(P<0.05)。 (3)OB用唑來(lái)膦酸處理后，唑來(lái)膦酸使OB的CCK-8實(shí)驗(yàn)吸光值呈不同程度升高。 (4)唑來(lái)膦酸作用24 h和48 h后，OB RANKLmRNA表達(dá)變化不明顯。作用72 h，低濃度(10-9mol/L)唑來(lái)膦酸顯示能降低RANKL mRNA表達(dá)，與對(duì)照(0 mol/L)比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。OB培養(yǎng)上清的sRANKL

5、濃度也呈現(xiàn)類似的變化。 (5)唑來(lái)膦酸作用24 h后，OB OPG mRNA表達(dá)變化不明顯。作用48 h，呈不同程度增加，以10-8 mol/L濃度最明顯，與對(duì)照(0 mol/L)比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。作用72 h，呈不同程度增加，以10-7mol/L濃度最明顯，與對(duì)照(0 mol/L)比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 OB培養(yǎng)上清的OPG濃度也呈現(xiàn)類似的變化。 結(jié)論： 可以從M