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1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文CpG重組質(zhì)粒的體外篩選及其在豬體內(nèi)的安全性研究姓名:嚴(yán)彩紅申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:朱鴻飛20050601AbStractTheSPFswineperipheralbloodmononuclcarcells(PBMCs)byFicollgradientcentrifugationprocedure,werepreparedandstimulatedbyrecombinantpcDNAKCpG
2、一1,pcDNAKCpG一2peDNAKCpG一3andpcDNAKCpG一4withfourdoses(125pg,25/tg,50lag,10O煺)respectivelyTheeffectofthelymphocytetransformationwasdetectedby~rTTassayItisshowedthatthefourplasmidshaddifferentextentimmtmostimulatoryeffect;t
3、hestimulateindexofthe10pgofpeDNAKCpG4is63Afterelaborateanalysis,theconclusionwasdrawnthatthepeDNAKCpG2hadthemostimmtmostimulatoryactivityonswinebecauseithadagoodimmunostimulatoryeffectevenatlowdosesTheswineinjectedwith50
4、0pgofpcDNAKCpG2withthemostintmunstimulatmyactivitywereslaughteredtoextractthegDNAofheartliverspleen,lung,kidneybloodandmuscleoftheinjectionsiteat4h,4d,8d15dand30dafterinjectionThenthedistributionandpersistenceoftheplasmi
5、dinthetissuesweredetectedbyPCRusingspecificprimersItisshowedthatpeDNAKCpG2wasdetectedinmuscleat4hafterinjection;FourdayslaterthefragmentofplasmidwasamplifiedfromthebloodandmuscleofonepigbyPCRTheplasmidcouldexistinorgansn
6、omorethan8daysafterinjectionOnthebaseofaboveresearch,thegDNAofPCRpositiveandNO9pigat30dafter螄ectionwasidentifiedbysouthernblottingwithaDIGlabeledprobetodeterminewhethertheplasmidhadintegratedintohostchromosomeornotResult
7、sshowedthattheplasmiddidnotintegrateintothegDNAofswineGenerally,peDNAKCpG2hasthemostimmunostimulatroyeffectonswine;thedistributionandpersistenceoftheplasmidcouldexistinorgansnomorethan8daysafterinjeetion;anditwouldn’tint
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