新型生物相容性納米微球的制備及其siRNA遞送效率的研究.pdf

1、RNAi（RNA干擾）可以理解為由雙鏈RNA(dsRNA)靶向序列特異性調(diào)控基因表達(dá)而導(dǎo)致的基因沉默現(xiàn)象，是保守的基因調(diào)節(jié)機(jī)能，在細(xì)胞的發(fā)育、分裂、分化以及疾病等各種生理過程中扮演重要的轉(zhuǎn)錄后(post-transcriptional)基因調(diào)控角色。RNA干擾技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中具有著巨大的應(yīng)用潛力。然而，目前研究出高效、新穎的遞送載體是RNAi在臨床應(yīng)用上所必需的。在本文中我們利用了本實(shí)驗(yàn)室在RNAi研究領(lǐng)域上的優(yōu)勢條件以及之前以多糖、樹

2、枝狀聚合物、脂質(zhì)體為基礎(chǔ)制備納米顆粒的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，在本研究中設(shè)計(jì)并合成了新型的凝膠多糖類納米微粒，基于膽固醇和基于脂質(zhì)的納米微粒，并采用這三種納米微粒為傳送載體來評價(jià)siRNA的體內(nèi)外傳送效率。
　　我們已合成了基于curdlan的納米微粒(6AC-100PEG)，它是通過mPEG2000與6-氨基-6-脫氧-凝膠多糖(6AC-100)相結(jié)合而成的。通過在HepG2細(xì)胞上轉(zhuǎn)染siGAPDH，發(fā)現(xiàn)此復(fù)合物能使細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)源性GAPDH基

3、因的表達(dá)量明顯降低。通過在小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染siApoB，發(fā)現(xiàn)此復(fù)合物能將小鼠肝臟內(nèi)的ApoB信使RNA(mRNA)表達(dá)水平降低。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明6AC-100PEG在體內(nèi)外都能有效地遞送siRNA并能誘導(dǎo)其RNAi效應(yīng)。而且之前沒有人做過關(guān)于將以curdlan為基礎(chǔ)的納米微粒應(yīng)用于生物治療考查其RNAi效率的研究，所以我們這個(gè)研究課題為較新穎且有其意義。
　　我們還設(shè)計(jì)了高效脂質(zhì)siRNA遞送載體-DoGo3脂質(zhì)復(fù)合物，它是由天然氨基

4、酸合成的新型多肽類。首先通過生物素標(biāo)記的siRNA的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DoGo3脂質(zhì)體復(fù)合物能將siRNA遞送到小鼠的肝、脾、肺等器官，還能有效地降低其載脂蛋白B(ApoB)的表達(dá)水平，根據(jù)以上這些結(jié)果我們設(shè)計(jì)了將脂質(zhì)復(fù)合物應(yīng)用于裸鼠上傳送肺腫瘤的新設(shè)想。以沒有任何修飾的DoGo3脂質(zhì)復(fù)合物（即沒有腫瘤受體的）為轉(zhuǎn)染載體，在裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染紅外標(biāo)記的siRNA，發(fā)現(xiàn)此復(fù)合物能將熒光標(biāo)記的siRNA遞送至肺和周圍的腫瘤中。
　　最后，我們還