新型凝膠多糖納米粒子的制備及體外遞送siRNA研究.pdf

1、RNA干擾（RNAi）是一種轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)節(jié)作用，利用RNAi所產(chǎn)生的基因沉默現(xiàn)象能夠用于癌癥等疾病的臨床治療，而RNAi臨床應用的關(guān)鍵之一是構(gòu)建安全有效的遞送載體，以實現(xiàn)對基因藥物的有效遞送。
　　本文以天然curdlan多糖為原料，首先通過對其結(jié)構(gòu)單元的C6位進行疊氮和還原，制備不同氨基化程度（30％，50％，70％和100％）的6-氨基-6-脫氧-凝膠多糖(6AC)。經(jīng)IR和13CNMR確定結(jié)構(gòu)，通過激光粒度儀和掃描電鏡

2、測試所形成納米粒子的粒徑分布、形貌、Zeta電位，并通過酸堿滴定的方法測定對H+的緩沖能力;然后通過體外細胞siRNA轉(zhuǎn)染試驗對其作為基因載體的安全性及對基因遞送效率等做了研究。研究結(jié)果表明此新型的6AC能形成粒徑約為120nm的納米粒子，且其水溶液具有很好的氫離子負載能力和正的Zeta電位值，6AC與siRNA結(jié)合后形成粒徑約為130nm的粒子;此載體對于HepG2細胞和Hela細胞顯示了較低的細胞毒性，對于A549、H727、HCT

3、116，THP-1和MEF細胞，能夠高效率遞送siRNA使內(nèi)源性靶標mRNA水平下調(diào)70-90％，而且對于小鼠胚胎干細胞能顯著地在GFP蛋白水平上降低其基因的表達?？梢?，此新型的氨基化curdlan納米粒子作為siRNA載體具有潛在的進一步研發(fā)的價值。
　　綜合而言，本論文成功合成了水溶性氨基化curdlan并制備了siRNA納米載體，首次應用于siRNA的體外遞送中，并從細胞毒性、基因水平和蛋白水平較系統(tǒng)研究了其作為siRNA載