氨基化硅納米顆粒制備及其基因轉(zhuǎn)移載體性能.pdf

1、目的：尋找合適的基因轉(zhuǎn)染載體一直是基因治療中的一大難題，二氧化硅納米顆粒(silica nanoparticles，SLNPS)以其良好的生物相容性、易于修飾以及低毒副作用而被人所期待，其應(yīng)用前景也被普遍看好。本室前期研究已經(jīng)證實(shí)適量SLNPS不會(huì)影響細(xì)胞的增殖，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)出較低的生殖毒性與急性毒性。本研究旨在通過(guò)對(duì)SLNPS進(jìn)行氨基化修飾，并優(yōu)化修飾條件，提高SLNPS的表面電位及結(jié)合DNA的穩(wěn)定性與有效性，同時(shí)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)分析優(yōu)

2、化后顆粒的轉(zhuǎn)染效果。 第一章氨基化SLNPS的制備及修飾條件優(yōu)化 方法：微乳法制備SLNPS，利用硅烷偶聯(lián)劑(N-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷，AEAPS)的偶聯(lián)作用，一次性制備表面偶聯(lián)氨基基團(tuán)的二氧化硅納米顆粒，并對(duì)修飾條件進(jìn)行優(yōu)化摸索，制備的顆粒經(jīng)冷凍干燥后，電鏡觀察其粒徑、分散性，電位分析儀檢測(cè)納米顆粒表面Zeta電位值，觀察室溫下存儲(chǔ)6個(gè)月后同批顆粒DNA結(jié)合能力是否一致。 結(jié)果：通過(guò)優(yōu)化條件，

3、制備粒徑在65nm、分散均勻、表面電位為+31.5my的氨基化修飾的SLNPS，在質(zhì)量比20：1下能與DNA完全結(jié)合，顆粒制備6個(gè)月后，超聲分散外觀與初始制備時(shí)無(wú)差別，但結(jié)合能力有所下降。 第二章氨基化納米顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率分析 方法：梯度瓊脂糖凝膠電泳分析SLNPS與DNA的結(jié)合能力，并觀察其與DNA結(jié)合后，是否能有效保護(hù)DNA不被血清所降解；一般轉(zhuǎn)染方法和SLNPS-電穿孔復(fù)合轉(zhuǎn)染分析SLNPS轉(zhuǎn)染HL7702細(xì)胞的效

4、率及穩(wěn)定性，MTT試驗(yàn)分析SLNPS分別對(duì)肝細(xì)胞(HL7702細(xì)胞)和肝癌細(xì)胞(Bel-7402細(xì)胞)的毒性。 結(jié)果：優(yōu)化條件下的SLNPS在質(zhì)量比20：1時(shí)能完全結(jié)合并能有效保護(hù)DNA不被血清降解，流式細(xì)胞分析證實(shí)SLNPS用一般轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染HL7702細(xì)胞，其效率能穩(wěn)定在20％~30％，而SLNPS-電穿孔復(fù)合轉(zhuǎn)染雖效率高達(dá)60％以上，但與電轉(zhuǎn)染對(duì)照無(wú)明顯區(qū)別，MTT試驗(yàn)提示SLNPS對(duì)肝細(xì)胞毒性要低于脂質(zhì)體，而B(niǎo)el-74