潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸黏膜Flt3和Flt3L表達(dá)的研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UlcerativeColitis，UC)是炎癥性腸病(InflammatoryBowelDisease，IBD)的一種，該疾病主要侵及黏膜層和黏膜下層，其病因尚不十分清楚。近年來(lái)，腸黏膜中的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcell，Treg)的作用是學(xué)者們研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有的觀點(diǎn)認(rèn)為DC和Treg之間的免疫調(diào)節(jié)在潰瘍性結(jié)腸炎的炎癥反應(yīng)過(guò)程中起重要作用，并認(rèn)為Fms樣

2、絡(luò)氨酸激酶3(Fms-liketyrosinekinase3，F(xiàn)lt3)及其配體（Flt3ligand，F(xiàn)lt3L）參與了UC炎癥反應(yīng)過(guò)程中DC和Treg之間的調(diào)節(jié)。因此本研究采用小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，觀察小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型組與正常組小鼠的一般狀態(tài)、疾病活動(dòng)指數(shù)、光鏡下觀察HE染色病理變化和結(jié)腸黏膜損傷情況，并從細(xì)胞水平檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜DC和Treg的表達(dá)，從基因水平和蛋白水平檢測(cè)Flt3和Flt3L的表達(dá)，探討DC和Treg及相關(guān)因

3、子Flt3和Flt3L在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生、發(fā)展中所起的作用，為臨床UC的治療打下理論基礎(chǔ)。
　　 方法:采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)自飲法建立動(dòng)物模型，BALB/c雄性小鼠20只，體重約25g，隨機(jī)分為2組，每組10只。正常組:予飲用蒸餾水;模型組:予自飲50g/LDSS溶液7天，觀察小鼠的一般狀態(tài)、記錄疾病活動(dòng)指數(shù)(diseaseactivityindex，DAI)，并于造模后第7天處死小鼠，記錄結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(colonic

4、mucosadamageindex，CDMI)，光鏡下觀察HE染色小鼠結(jié)腸黏膜病理學(xué)改變，流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜DC、Treg在細(xì)胞水平的表達(dá)變化，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜Flt3在蛋白水平的表達(dá)變化，ELISA方法檢測(cè)小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達(dá)變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-TimePCR)方法檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜Flt3/Flt3L在基因水平的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.模型組小

5、鼠DAI評(píng)分3.15±0.28、CMDI評(píng)分2.44±0.24與正常組DAI評(píng)分0.00±0.00、CMDI評(píng)分0.00±0.00比較均明顯升高，差異性顯著(P＜0.05)，提示小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型成功。
　　 2.模型組小鼠結(jié)腸黏膜中DC占細(xì)胞百分率0.19±0.18％、Treg占CD4+T的百分率4.11±2.14％與正常組小鼠結(jié)腸黏膜中DC占細(xì)胞百分率2.83±1.52％、Treg占CD4+T的百分率14.02±1.73％

6、比較均明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.模型組小鼠結(jié)腸黏膜中Flt3在蛋白水平上的表達(dá)量82.19±5.34較正常組Flt3的表達(dá)量31.66±2.31明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4.模型組小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達(dá)量為36.25±6.34pg/ml較正常組Flt3L表達(dá)量57.24±5.97pg/ml明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 5.模型組小鼠結(jié)

7、腸黏膜中Flt3mRNA的表達(dá)量0.53±0.06、Flt3LmRNA的表達(dá)量0.10±0.18較正常組Flt3mRNA的表達(dá)量1.01±0.13、Flt3LmRNA的表達(dá)量1.01±0.25比較均明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 在DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型中DC和Treg之間存在免疫調(diào)節(jié)失衡，而導(dǎo)致該失衡的原因是Flt3和Flt3L在DC和Treg之間所發(fā)揮的橋梁作用受損，最終導(dǎo)致潰