CdTe量子點(diǎn)的制備及其在生物大分子檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、免疫印跡（Immunoblot）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blot），是分離和識(shí)別復(fù)雜樣品中特定蛋白的常用技術(shù)，分辨率和實(shí)用性能高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，應(yīng)用于蛋白的定性和半定量分析等。但該技術(shù)步驟繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，有機(jī)熒光發(fā)色團(tuán)熒光穩(wěn)定性低，難以長(zhǎng)時(shí)間成像。不同的發(fā)色團(tuán)需要不同波長(zhǎng)的光源激發(fā)，使成像復(fù)雜化，且不能同時(shí)檢測(cè)多種蛋白。本文結(jié)合量子點(diǎn)技術(shù)，將連接有一抗或二抗的量子點(diǎn)作為優(yōu)良的熒光成像劑應(yīng)用于免疫印跡分析，光穩(wěn)定性強(qiáng)，準(zhǔn)確度、

2、精密度均優(yōu)于傳統(tǒng)方法，能定性定量檢測(cè)蛋白，不需要另加化學(xué)發(fā)光試劑，成像系統(tǒng)簡(jiǎn)單，步驟簡(jiǎn)單，有望成為蛋白定性定量分析的新手段。全文主要分為以下四個(gè)部分：
　　第一章綜述
　　本章對(duì)三種類型量子點(diǎn)的制備方法進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述，比較各種類型量子點(diǎn)的優(yōu)劣勢(shì)；介紹常用量子點(diǎn)偶聯(lián)生物分子的技術(shù)及體系組成；最后簡(jiǎn)介了目前量子點(diǎn)在Western blot中的應(yīng)用，在定量分析多組分蛋白中體現(xiàn)了優(yōu)異的品性。
　　第二章水溶性CdTe量子點(diǎn)的制備

3、及表征
　　本章以碲粉、氯化鎘為原料，采用水相制備法制備了水溶性CdTe量子點(diǎn)，系統(tǒng)地研究了鎘碲比、MPA的量、pH值、回流時(shí)間、反應(yīng)溫度等反應(yīng)條件對(duì)CdTe量子點(diǎn)生長(zhǎng)速率和熒光強(qiáng)度的影響；采用熒光光譜、紫外光譜、瓊脂糖電泳、激光粒度儀、高效液相色譜（HPLC）等多種表征技術(shù)對(duì)制備的CdTe量子點(diǎn)進(jìn)行表征評(píng)價(jià)，測(cè)定CdTe量子點(diǎn)的熒光量子產(chǎn)率。確立制備CdTe量子點(diǎn)的最佳反應(yīng)條件為摩爾比Cd2+:HTe－=1:0.5:2，pH值為

4、9，油浴溫度為130℃?；亓鲿r(shí)間為3 h的條件下制備的CdTe量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，熒光量子產(chǎn)率最高，尺寸較均一，大約10 nm。
　　第三章 CdTe量子點(diǎn)-蛋白偶聯(lián)物的制備及表征
　　本章采用共價(jià)偶聯(lián)的方法制備量子點(diǎn)-生物蛋白偶聯(lián)物。巰基丙酸修飾的水溶性CdTe量子點(diǎn)，利用EDC、NHS交聯(lián)劑將量子點(diǎn)表面羧基與生物蛋白氨基偶聯(lián)。確立偶聯(lián)β-HCG單抗最優(yōu)反應(yīng)條件，弱堿性環(huán)境下，37℃下反應(yīng)2-4 h可制備熒光強(qiáng)度高、穩(wěn)定性

5、好的CdTe量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物。采用熒光光譜、HPLC、瓊脂糖電泳、激光粒度儀等對(duì)偶聯(lián)物進(jìn)行表征，結(jié)果顯示，在最佳工藝條件下制備的量子點(diǎn)-蛋白偶聯(lián)物熒光強(qiáng)度較高，穩(wěn)定性好。
　　第四章 CdTe量子點(diǎn)-蛋白偶聯(lián)物在Western blot中的應(yīng)用
　　本章采用傳統(tǒng)Western blot檢測(cè)方法、量子點(diǎn)標(biāo)記一抗檢測(cè)法、量子點(diǎn)標(biāo)記二抗檢測(cè)法三種方法測(cè)定β-HCG，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明傳統(tǒng)方法的線性關(guān)系、精密度等