空氣放電對蓮藕采后腐敗菌抑菌機(jī)理的研究.pdf

1、蓮藕是一種水分含量高、組織脆嫩的水生蔬菜，但是在貯藏過程中容易褐變腐爛造成經(jīng)濟(jì)損失。目前針對蓮藕褐變所采取的大量措施，包括化學(xué)方法和物理方法，均不能有效抑制貯運期間腐敗微生物的生長繁殖，并且化學(xué)防腐方法通常會導(dǎo)致安全隱患，而空氣放電是一種綠色、安全的防腐保鮮方法。本文對蓮藕腐爛病患處分離純化的致病菌鑒定至種，采用空氣放電生成氣對致病菌進(jìn)行抑菌處理，通過細(xì)胞水平、分子水平、病程相關(guān)酶活性、呼吸代謝等方面系統(tǒng)研究空氣放電對蓮藕采后腐敗菌的影

2、響，以揭示空氣放電對蓮藕采后腐敗菌的抑制機(jī)理。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定蓮藕采后腐敗菌為三線鐮刀菌（Fusariumtricinctum），這與造成采前蓮藕腐敗病的病原菌蓮尖孢鐮刀菌(Fusarium.oxysporumf.sp.nelumbicola)屬別相同。
　　2.通過十字交叉法、凹玻片法、頂空氣體分析儀測定空氣放電生對F.tricinctum菌絲生長、孢子萌發(fā)、菌絲呼吸的影響。結(jié)果

3、顯示，空氣放電生成氣對F.tricinctum菌絲生長、孢子萌發(fā)、菌絲呼吸均具有顯著抑制作用;隨處理時間越長，抑制作用越強(qiáng);且Ozone+NAI處理對菌絲生長、孢子萌發(fā)、菌絲呼吸的抑制作用均優(yōu)于Ozone、NAI單獨處理。
　　3.通過掃描電鏡、透射電鏡、流式細(xì)胞儀研究空氣放電生成氣對F.tricinctum超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡的影響。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，Ozone處理菌絲的表面強(qiáng)烈變形、凹陷;而NAI處理菌絲的表面形態(tài)出現(xiàn)皺縮;Oz

4、one+NAI處理菌絲表面受到嚴(yán)重破壞、外層結(jié)構(gòu)不完整，菌絲體發(fā)生強(qiáng)烈變形、皺縮、凹陷。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)Ozone、NAI、Ozone+NAI處理的菌絲細(xì)胞核不清晰，線粒體數(shù)量減少，且菌絲細(xì)胞內(nèi)有較大液泡形成，菌絲外圍的連續(xù)外層不明顯，細(xì)胞有大量內(nèi)含物滲出，細(xì)胞壁與對照菌絲相比明顯變薄。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡試驗發(fā)現(xiàn)，空氣放電生成氣能夠顯著誘導(dǎo)F.tricinctum孢子凋亡，導(dǎo)致其線粒體活性氧簇ROS積累，促使線粒體膜電位超極化，

5、引起細(xì)胞凋亡。
　　4.采用電導(dǎo)率法、消化法、硫代巴比妥酸法，分光光度法，測定空氣放電生成氣對F.tricinctum細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性以及病程相關(guān)酶的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著處理時間的延長，細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性均逐漸增大，細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度加深，MDA積累量逐漸增加，其中Ozone+NAI處理條件下F.tricinctum細(xì)胞壁、細(xì)胞膜受損程度比同一處理時間Ozone、NAI單獨處理條件下顯著(P＜0.05);三種不同處理條件均

6、能使細(xì)胞壁降解酶多聚半乳糖醛酸酶、β-D-葡萄糖苷酶活性顯著降低，其中Ozone+NAI處理對兩種酶活性的抑制明顯優(yōu)于Ozone、NAI單獨處理(P＜0.05)。
　　5.分別測定空氣放電對F.tricinctum離體、活體條件下線粒體復(fù)合酶及ATP酶活性的變化。結(jié)果顯示，在離體條件下，空氣放電對線粒體復(fù)合酶及ATP酶的活性無顯著抑制作用;而在活體條件下，空氣放電生成氣處理F.tricinctum24 h，在培養(yǎng)至第3d，線粒體復(fù)