乙醇降解菌的篩選、16SrDNA鑒定以及培養(yǎng)基優(yōu)化和生長(zhǎng)特性研究.pdf

1、酒文化已有幾千年的歷史,乙醇的利用在生活中逐漸增多。但是,過(guò)量飲酒嚴(yán)重影響著人們的身體健康,含有乙醇的廢液的大量排放破壞了生態(tài)平衡,對(duì)環(huán)境帶來(lái)了很大的影響。隨著人們生活水平的要求不斷提高,以及人們對(duì)環(huán)境的保護(hù)意識(shí)逐漸增強(qiáng),解酒劑以及乙醇廢液的處理日益受到人們的關(guān)注。本研究的主要內(nèi)容如下:
　　 1、基于透明圈法篩選乙醇降解菌
　　 本研究從酸敗的酒槽、腐爛的水果以及腌制的咸菜中,利用透明圈法獲得了四株具有降解乙醇能力的菌

2、株。編號(hào)分別為Ⅰ號(hào)、Ⅳ號(hào)、Ⅶ號(hào)和Ⅷ號(hào),經(jīng)過(guò)革蘭氏染色實(shí)驗(yàn),獲得的四株菌株均為革蘭氏陰性菌。
　　 2、基于16S rDNA序列對(duì)乙醇降解菌的鑒定分析
　　 利用3730 DNA分析儀對(duì)獲得的四株菌株分別進(jìn)行了16S rDNA測(cè)序,Ⅰ號(hào)菌株的16S rDNA的序列堿基數(shù)為1413 bp,經(jīng)過(guò)同源性分析以及基因系統(tǒng)樹(shù)分析,Ⅰ號(hào)菌株與植物乳桿菌的同源性達(dá)到100％;Ⅳ號(hào)菌株的16S rDNA的序列堿基數(shù)為1233 bp,經(jīng)過(guò)同

3、源性分析以及基因系統(tǒng)樹(shù)分析,Ⅳ號(hào)菌株與希氏乳桿菌的同源性達(dá)到99.1％;Ⅶ號(hào)菌株的16S rDNA的序列堿基數(shù)為1354 bp,經(jīng)過(guò)同源性分析以及基因系統(tǒng)樹(shù)分析,Ⅶ號(hào)菌株與巴氏醋桿菌的同源性達(dá)到100％;Ⅷ號(hào)菌株的16S rDNA的序列堿基數(shù)為1354 bp,經(jīng)過(guò)同源性分析以及基因系統(tǒng)樹(shù)分析,Ⅷ號(hào)菌株與希氏乳桿菌的同源性達(dá)到99.5％。
　　 3、基于正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化乙醇降解菌的培養(yǎng)基
　　 經(jīng)過(guò)乙醇降解速率的研究,發(fā)現(xiàn)Ⅶ

4、號(hào)菌株降解乙醇的速率最高。本研究對(duì)Ⅶ號(hào)菌株的培養(yǎng)基條件進(jìn)行了探究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ⅶ號(hào)菌株的最佳碳源為牛肉膏,最佳氮源為蛋白胨。采用正交法對(duì)Ⅶ號(hào)菌株的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化處理,結(jié)果顯示,Ⅳ號(hào)菌株的最優(yōu)培養(yǎng)基組合為0.5％牛肉膏、1.0％蛋白胨、0.3％NaCl、0.1％K2HPO4·3H2O、0.05％MgSO4·7H2O和0.001％FeSO4·7H2O。培養(yǎng)基優(yōu)化后,Ⅶ號(hào)菌株的乙醇降解能力為初始培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株的3.19倍。
　　 4、

5、探究了外界條件對(duì)乙醇降解菌的影響
　　 本研究探究了溫度、pH值和轉(zhuǎn)速對(duì)Ⅶ號(hào)菌株生長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示,該菌株最佳的培養(yǎng)溫度為35℃,最佳初始pH值為5.5,在60轉(zhuǎn)／分、120轉(zhuǎn)／分和180轉(zhuǎn)／分培養(yǎng)中,菌株生長(zhǎng)的影響不大,而在0轉(zhuǎn)／分的培養(yǎng)下,菌株生長(zhǎng)比較緩慢。因此,最佳的外界培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為35℃,初始pH值為5.5,轉(zhuǎn)速為60轉(zhuǎn)／分。
　　 5、探究了不同有機(jī)酸對(duì)乙醇降解菌的影響
　　 本研究選取了蘋(píng)

6、果酸、檸檬酸和乙酸對(duì)Ⅶ號(hào)菌株生長(zhǎng)的影響,設(shè)定梯度分別為0.3％、0.5％和0.7％。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.5％的蘋(píng)果酸明顯提高菌株的生長(zhǎng),而0.7％的蘋(píng)果酸對(duì)菌株的影響有抑制作用；而乙酸對(duì)菌株的生長(zhǎng)均具有抑制作用;0.3％的檸檬酸對(duì)菌株的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用,但是,0.5％和0.7％的檸檬酸對(duì)菌體的生長(zhǎng)卻有抑制作用。結(jié)果表明,0.5％的蘋(píng)果酸對(duì)菌體生長(zhǎng)的促進(jìn)效果最佳。
　　 本研究篩選的乙醇降解菌可以作進(jìn)一步研究并應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn),為新型生物