共軛亞油酸高產(chǎn)菌株的篩選、鑒定、培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化及紫外誘變研究.pdf

1、共軛亞油酸(CLA)作為一種新型的功能性脂肪酸而備受關注。CLA因具有抗癌、抗動脈粥樣硬化作用、體脂調節(jié)及治療肥胖作用、免疫調節(jié)作用及抗氧化作用,被廣泛應用于醫(yī)藥、食品添加劑和保健品行業(yè)。目前,工業(yè)上主要采用化學法生產(chǎn)CLA,難以滿足藥品、食品等領域的高純度、無有害成分殘留的要求。而許多微生物能夠利用自身的酶將LA轉化成CLA。與化學合成法相比,利用微生物合成CLA的特異性強,條件也非常溫和,產(chǎn)物中活性CLA異構體含量高,與天然CLA異

2、構體成分相似,無毒副作用,有利于產(chǎn)品的開發(fā)應用。
　　 本論文就乳酸菌產(chǎn)共軛亞油酸展開了一系列的研究。首先,從自制泡菜汁中篩選出CLA產(chǎn)量最高的乳酸菌并進行菌種鑒定；其次,對該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分、發(fā)酵條件和底物添加量進行了優(yōu)化；再次,以該菌株為出發(fā)菌株,通過三次紫外誘變選育出CLA高產(chǎn)菌株。研究結果如下:
　　 (1)從自制泡菜汁中篩選出一株CLA產(chǎn)量較高的乳酸菌QL2,其共軛亞油酸產(chǎn)量達23.263μg／mL,

3、亞油酸轉化率為3.88％。根據(jù)其形態(tài)及生理生化反應將該菌株鑒定為明串珠菌(Leuconostoc.sp),該菌株命名為明串珠菌QL2。
　　 (2)對明串珠菌QL2進行發(fā)酵培養(yǎng)基組成成分的優(yōu)化,得到最優(yōu)培養(yǎng)基組成為:乳糖2％,酵母膏3％,CH3COONa0.2％,MgSO4·7H2O0.08％,K2HPO4·3H2O0.3％.MnSO4·H2O0.015％。優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成成分后,發(fā)酵液中CLA產(chǎn)量由原來的23.263μg／m

4、L提高到37.831μg／mL,LA轉化率由優(yōu)化前的3.88％提高到6.31％,是未優(yōu)化前的1.63倍。
　　 (3)在優(yōu)化培養(yǎng)基組成成分的基礎上,對明串珠菌QL2的發(fā)酵條件進行優(yōu)化,得到其產(chǎn)CLA發(fā)酵的最優(yōu)條件為:發(fā)酵初始pH為6.5,發(fā)酵時間為28h,發(fā)酵溫度為37℃。優(yōu)化發(fā)酵條件后,發(fā)酵液中CLA產(chǎn)量由原來的37.831μg／mL提高到40.9531μg／ml,LA轉化率由優(yōu)化前的6.31％提高到6.83％,是未優(yōu)化前的1

5、.08倍。
　　 對明串珠菌QL2的底物LA添加量進行優(yōu)化,得到最適的底物LA添加量為0.4％(V／V)。此時,CLA產(chǎn)量達到288.74μg／ml,LA轉化率達7.21％。LA轉化率是未優(yōu)化前的1.06倍。
　　 (4)以明串珠菌QL2為出發(fā)菌株,經(jīng)過三次紫外誘變后,篩選到突變株UV39,其CLA產(chǎn)量為28.478μg／mL,比原始菌株明串珠菌QL2的CLA產(chǎn)量提高了22.4％,LA轉化率提高了0.87％。對誘變后篩選