釀酒酵母甘露聚糖的制備方法研究.pdf

1、酵母甘露聚糖存在于酵母細(xì)胞壁的外層，約占酵母細(xì)胞壁干重的40％，是一類具有顯著生理活性的微生物多糖。甘露聚糖具有增強(qiáng)免疫力，吸附霉菌毒素，抗腫瘤，抗氧化，降血脂，抗輻射等功能，廣泛應(yīng)用于保健食品、醫(yī)藥和飼料工業(yè)。本課題研究了高甘露聚糖釀酒酵母的發(fā)酵培養(yǎng)條件、酵母細(xì)胞壁預(yù)處理方法、甘露聚糖提取及精制工藝，主要研究結(jié)果如下:
　　高甘露聚糖釀酒酵母的培養(yǎng)。不同釀酒酵母菌株的細(xì)胞甘露聚糖含量差別很大，在所篩選的10株釀酒酵母中，菌株KD

2、10甘露聚糖含量最高。靜止期酵母細(xì)胞的甘露聚糖含量高于對數(shù)期。與葡萄糖相比，葡萄糖+乳糖為碳源時可顯著提高甘露聚糖含量。同酵母浸粉相比，酵母浸粉與蛋白胨復(fù)合作氮源時，甘露聚糖含量稍有增加，且菌體生長好于酵母浸粉單獨(dú)做氮源。碳氮比較低時，有利于甘露聚糖的合成。葉酸明顯促進(jìn)了釀酒酵母KD10甘露聚糖的合成。滲透脅迫以及酒精脅迫使得細(xì)胞甘露聚糖含量上升。釀酒酵母KD10的最佳培養(yǎng)基為:37.5 g/L葡萄糖、12.5 g/L乳糖、37.5 g

3、/L酵母浸粉、37.5 g/L蛋白胨、0.3 g/L磷酸二氫鉀、0.3 g/L磷酸氫二鉀、0.5g/LMgSO4。
　　酵母細(xì)胞壁的預(yù)處理方法研究。在適宜的自溶條件（pH6.0、水浴溫度55℃、保溫時間40 h）下，酵母KD10甘露聚糖釋放率為15.85％。采用蝸牛酶處理酵母細(xì)胞，甘露聚糖釋放率非常低，僅為0.31％。121℃高溫處理酵母細(xì)胞可大量釋放甘露聚糖。與高溫短時處理(121℃、30 min)相比，自溶+高溫處理、機(jī)械破壁

4、+高溫處理可顯著提高甘露聚糖釋放率，但與高溫長時處理(121℃、2h)相比，它們的甘露聚糖釋放率差異并不顯著。釀酒酵母高溫處理的適宜條件為:菌懸液濃度15％，pH7.0，處理溫度121℃，處理時間10h，其甘露聚糖釋放率達(dá)95.89％。
　　甘露聚糖的提取與純化。甘露聚糖上清液濃縮倍數(shù)、乙醇濃度對甘露聚糖提取影響顯著。隨著醇沉溫度的升高，甘露聚糖粗糖產(chǎn)量逐漸降低。醇沉pH對甘露聚糖提取影響不顯著。醇沉?xí)r間為0.25～10 h時，甘

5、露聚糖粗糖產(chǎn)量和純度幾乎沒有差異。當(dāng)醇沉?xí)r間超過10h時，甘露聚糖產(chǎn)量明顯下降。適宜的甘露聚糖醇沉工藝條件為:上清液濃縮倍數(shù)6，pH7.0，醇沉溫度4℃，乙醇濃度90％，時間1h。所制備的甘露聚糖純度和產(chǎn)量分別22.24％和92.60 mg/g。采用分級醇沉的方法可制備不同純度的甘露聚糖。甘露聚糖粗糖經(jīng)過截留分子量3500、7500、14000的透析袋膜分離后，其純度明顯提高，其中截留分子量3500的透析袋效果最好，甘露聚糖純度達(dá)到36