釀酒酵母發(fā)酵法制備還原型谷胱甘肽的初步研究.pdf

1、還原型谷胱甘肽(簡(jiǎn)稱GSH)是一種天然活性肽，具有清除自由基、解毒等多種生理功能。本文利用釀酒酵母發(fā)酵法生產(chǎn)GSH，對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)菌體作為原料提取GSH和陽離子交換樹脂純化GSH等進(jìn)行了研究。 研究建立了高效液相法測(cè)定谷胱甘肽含量的檢測(cè)條件，在本文的檢測(cè)條件下，在0.02～0.4mg/mL的濃度范圍內(nèi)谷胱甘肽濃度與峰面積成很好的線性關(guān)系(R2=0.9999)，精密度良好(RSD=0.28％)，加標(biāo)回收率為99.99％。

2、研究了ALLOXAN法對(duì)谷胱甘肽含量檢測(cè)的情況，結(jié)果表明谷胱甘肽的濃度和吸光度值成很好的線性關(guān)系(R2=0.9991)，因此本章建立的兩種方法都能夠準(zhǔn)確和快速的檢測(cè)谷胱甘肽的含量。 考察了培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件對(duì)釀酒酵母發(fā)酵合成谷胱甘肽的影響，確定了培養(yǎng)基組成：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，(NH4)2SO410g/L，MgSO4·7H2O3g/L，KH2PO45g/L，F(xiàn)eSO410-5mol/L，ZnSO410-5mol

3、/L。在此培養(yǎng)基組成的基礎(chǔ)上，對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的發(fā)酵條件為：種齡24h，接種量15％，發(fā)酵培養(yǎng)基的裝液量為30ml/250ml三角瓶，培養(yǎng)溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速220r/min，發(fā)酵時(shí)間72h。釀酒酵母在優(yōu)化后的發(fā)酵工藝條件下進(jìn)行發(fā)酵，谷胱甘肽的合成量由優(yōu)化前的43.5mg/L發(fā)酵液提高至235.8mg/L發(fā)酵液。 對(duì)從釀酒酵母細(xì)胞中提取谷胱甘肽進(jìn)行了研究，首先考察了不同pH值和不同溫度下，溶液中谷胱甘肽的穩(wěn)定性情況。接

4、著采用熱水提取和乙醇溶液提取兩種方法提取釀酒酵母中的谷胱甘肽，對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，比較了兩種方法提取所得的谷胱甘肽產(chǎn)量。兩種方法所得的谷胱甘肽產(chǎn)量很接近，綜合考慮兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)選擇采用40％乙醇溶液提取法對(duì)釀酒酵母中的谷胱甘肽進(jìn)行提取。 最后采用001×7(732)型陽離子交換樹脂對(duì)提取液中谷胱甘肽進(jìn)行了初步的分離純化，確定了優(yōu)化的純化條件。陽離子交換樹脂對(duì)谷胱甘肽純化后的回收率為76.3％，蒸干得到谷胱甘肽粗品，用