谷胱甘肽的合成及其檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、本論文對(duì)谷胱甘肽(GSH)的酶法合成及其過(guò)程檢測(cè)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　(1)研究半胱氨酸(Cys)干擾對(duì)于合成GSH四氧嘧啶法檢測(cè)的影響，開(kāi)發(fā)一種新的適用酶法合成GSH過(guò)程檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)設(shè)計(jì)干擾實(shí)驗(yàn)，探討復(fù)雜的干擾現(xiàn)象形成的原因，首次提出GSH、Cys與四氧嘧啶反應(yīng)生成的H2O2和半胱氨酸中的巰基共同干擾了GSH的檢測(cè)。研究設(shè)計(jì)干擾模型和抗干擾補(bǔ)償機(jī)制，結(jié)合自動(dòng)化計(jì)算，建立一種新型GSH抗干擾快速檢測(cè)技術(shù)。

2、結(jié)果顯示，新的四氧嘧啶補(bǔ)償法的GSH濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)方程為y=3.0629x+0.0001，R2=0.9999；經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，當(dāng)干擾底物Cys濃度為GSH濃度的4倍以下時(shí)，檢測(cè)GSH、Cys的回收率分別達(dá)到95％～100%和78%~120%。相比四氧嘧啶法，四氧嘧啶補(bǔ)償法顯著增強(qiáng)了抗干擾能力，并同時(shí)滿足定量檢測(cè)GSH和半定量檢測(cè)Cys的目的。
　　(2)GSH合成的跟蹤實(shí)驗(yàn)，確定較優(yōu)酵母添加量和反應(yīng)時(shí)間。以GSH產(chǎn)量為考察指標(biāo)，較優(yōu)

3、的合成反應(yīng)條件為酵母添加量1.5g且反應(yīng)時(shí)間為5h，此時(shí)酶法合成的GSH產(chǎn)物濃度達(dá)到峰值。
　　(3)反應(yīng)液中前體配方的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。以GSH產(chǎn)量和前體轉(zhuǎn)化率為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)，結(jié)果表明，對(duì)于GSH產(chǎn)量，Cys影響極顯著，Glu、Gly影響顯著，且影響順序?yàn)镃ys>Glu>Gly；對(duì)于前體轉(zhuǎn)化率，Cys影響顯著，Glu、Gly影響不顯著，且影響順序?yàn)镃ys>Glu>Gly。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，得出4mM Cys、12mM G

4、lu和50mM Gly為優(yōu)化組合，前體轉(zhuǎn)化率比對(duì)照組(Glu20mM、Cys15mM和Gly40mM)提高112.17%。
　　(4)利用H2O2脅迫促進(jìn)GSH合成的研究。在反應(yīng)過(guò)程中定點(diǎn)添加H2O2的實(shí)驗(yàn)中，1～3mM H2O2在2～4h加入均提高了酶催化合成GSH的轉(zhuǎn)化率，而0h加入不利于GSH合成。進(jìn)一步設(shè)計(jì)采用單點(diǎn)、兩點(diǎn)和三點(diǎn)的添加策略實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示H2O2最佳的添加策略為在4h時(shí)加入H2O2至1mM濃度，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，前體