利用釀酒酵母生物合成谷胱甘肽及其分離純化的初步研究.pdf

1、谷胱甘肽是一種重要的生物活性物質(zhì)，不僅廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域，而且作為食品添加劑具有廣泛的應(yīng)用前景。利用微生物細(xì)胞進(jìn)行生物合成是其主要生產(chǎn)方式。 為進(jìn)一步提高酵母細(xì)胞生物合成谷胱甘肽的能力，選用一株具有較高谷胱甘肽合成活性的釀酒酵母SaccharomycescerevisiaeTB6，結(jié)合酵母細(xì)胞酶促合成GSH的活性測(cè)試，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究培養(yǎng)基組成對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及谷胱甘肽合成酶系活性的影響。在優(yōu)化培養(yǎng)基組成條件下，酵

2、母細(xì)胞生物量及谷胱甘肽合成酶系活性均得到提高，搖瓶試驗(yàn)中酶活力穩(wěn)定在9.02mg(GSH)/克濕細(xì)胞，30L發(fā)酵罐中酶活力亦高達(dá)8.56mg(GSH)/克濕細(xì)胞。 應(yīng)用卡拉膠與魔芋粉混合載體固定高活力的酵母細(xì)胞，催化合成谷胱甘肽。并對(duì)固定化細(xì)胞條件和固定化細(xì)胞生物合成的反應(yīng)條件進(jìn)行初步探索。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：反應(yīng)液pH值7，反應(yīng)溫度37℃，磷酸鹽緩沖液0.15mol/L的條件下，固定化細(xì)胞具有較高的GSH合成酶活力。 對(duì)生物

3、合成反應(yīng)液中谷胱甘肽的分離作了初步研究，考察了不同pH溶液中還原型谷胱甘肽的氧化情況。并對(duì)離子交換法提取谷胱甘肽的提取條件進(jìn)行了初步研究，確定了提取工藝條件：上柱最適pH為3.0，洗脫用HCl濃度為1mol/L，洗脫速度為30ml/min。 在論文的實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中，為滿足普通實(shí)驗(yàn)室的需要，工作中探索建立了一種快速簡(jiǎn)便的分光光度分析法，適用于生物酶催化合成反應(yīng)溶液中與半胱氨酸共存的還原型谷胱甘肽含量測(cè)定。樣品在室溫，堿性條件下與3