有機酸及植物生長激素對兩種食用菌菌絲生長的影響機制初探.pdf

1、對食用菌生長條件的研究目前多集中在影響食用菌生長發(fā)育的營養(yǎng)條件和環(huán)境條件方面。一方面是各種培養(yǎng)基質(zhì)的適用性和不同原材料的配比、C/N比例、基質(zhì)pH、含水量等基本營養(yǎng)需求，另一方面是不同生長發(fā)育階段的溫度，光照，水分，氧氣等環(huán)境條件。對其它有一定影響的微量因子等的研究不是很多。有機酸作為菌絲生長過程中的代謝產(chǎn)物會不斷的積累在培養(yǎng)料中，使料內(nèi)的酸度逐漸提高，過高的酸度直接影響菌絲細胞的新陳代謝和整個生命活動，還會增加雜菌污染的機會，所以了解

2、有機酸的代謝機制，有利于調(diào)控培養(yǎng)條件使之更適合菌絲的生長。
　　本研究利用外源添加一定量的有機酸和生長激素研究對菌絲生長的影響，從生物量、菌絲 DNA含量和菌絲生長速度三個宏觀表現(xiàn)判斷其對菌絲生長的作用程度。從而篩選出最利于菌絲生長的物質(zhì)添加濃度范圍并以有機酸為例進行影響機制的探究，通過構(gòu)建液相色譜分析方法監(jiān)測食用菌菌絲生長過程中培養(yǎng)液中的有機酸的種類和含量隨著培養(yǎng)時間的變化，并且監(jiān)測菌絲培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液中葡萄糖的含量隨著培養(yǎng)時間

3、的變化，從而對比判斷添加的有機酸影響菌絲生物量、菌絲 DNA含量和菌絲生長速度的表現(xiàn)原因僅僅是因為提供了一個酸性環(huán)境還是作為一種碳源被菌絲利用了，若有機酸參與了菌絲的代謝，其在菌絲培養(yǎng)過程中被利用完了還是利用一部分等等問題就可以得到解答?？紤]到實驗所用的標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)基本身含有多種有機酸，其中檸檬酸含量最多，本實驗又采用成分清楚，含量精確的察氏培養(yǎng)基用相同的方法培養(yǎng)菌絲，然后分析有機酸的種類和含量變化，從而對比得出添加一定量的有機酸對菌

4、絲生長促進作用的影響機制。
　　1.外源添加植物激素對食用菌菌絲生長的影響
　　本研究以白色金針菇G1、黃色金針菇F29和杏鮑菇XH為研究對象，通過在標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)液中添加不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸、2,4-D、萘乙酸和玉米素，采用液體搖瓶培養(yǎng)的方法研究不同濃度的赤霉素、吲哚乙酸、2,4-D、萘乙酸和玉米素對G1、F29和XH菌絲生長的影響。主要以生物量為指標(biāo)初步篩選出對菌絲生物量有正向促進作用的植物激素及其濃度范圍，結(jié)果表

5、明在實驗所添加的濃度范圍內(nèi)，一定濃度的赤霉素和2,4-D對菌絲生物量有明顯的正向促進作用，吲哚乙酸和萘乙酸的刺激作用大，實驗濃度條件下均抑制菌絲生長，玉米素對菌絲生物量的影響作用不明顯。
　　2.外源添加有機酸對食用菌菌絲生長的影響
　　本研究以白色金針菇G1、黃色金針菇F29和杏鮑菇XH為研究對象，通過在標(biāo)準(zhǔn)PDB培養(yǎng)液中添加不同濃度的草酸、檸檬酸和酒石酸，采用液體搖瓶培養(yǎng)研究不同濃度的草酸，檸檬酸，酒石酸對G1、F29和

6、XH菌絲生長的影響。主要以生物量為指標(biāo)初步篩選出對菌絲生物量有正向促進作用的有機酸濃度范圍，在實驗所設(shè)置濃度梯度范圍內(nèi)得到初步結(jié)論，一定濃度的草酸、檸檬酸和酒石酸均對菌絲生長有正向促進作用，G1和F29在0.005％的草酸濃度，0.02%檸檬酸濃度，0.01%酒石酸濃度下生物量積累最多，XH在0.01%的草酸濃度，0.04%檸檬酸濃度，0.02%酒石酸濃度下生物量積累最多。菌絲凍干研磨CTAB法測菌絲DNA含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在實驗添加有機酸

7、濃度范圍內(nèi)高濃度抑制菌絲生長或促進菌絲生長作用減弱，此時菌絲 DNA含量最高。采用在添加定量有機酸的棉籽殼固體培養(yǎng)料上測定菌絲生長速度，結(jié)果顯示隨著酸濃度的提高，特別是在酸濃度比較高時對菌絲生長有明顯的抑制作用，而低濃度的酸對菌絲生長有促進作用，0.02%的草酸、0.08%的檸檬酸和0.04%的酒石酸對G1和F29菌絲生長速度有最大促進作用，0.04%草酸、0.12%檸檬酸和0.08%酒石酸濃度下對XH菌絲生長有最大促進作用。
　

8、　3.高效液相色譜分析有機酸的方法構(gòu)建
　　本研究利用Shodex公司的離子排阻色譜柱SH1011柱和KC-811柱串聯(lián)對食用菌PDB培養(yǎng)液中的有機酸定性定量，探究菌絲生長過程中培養(yǎng)液中有機酸的種類和含量隨著培養(yǎng)時間的變化，以期得到有機酸對食用菌菌絲生長的影響機制。以高氯酸溶液為流動相，用紫外可見檢測器檢測，對流動相濃度、吸收波長、溫度、流速等條件進行優(yōu)化。確定的色譜條件為：以4mmol/L的高氯酸溶液（pH2.5）為流動相，流速

9、為1.0mL/min，柱溫度為60℃，檢測波長為210nm。
　　4. PDB培養(yǎng)液中有機酸定性定量的分析
　　本研究通過添加一定量的草酸，檸檬酸和酒石酸培養(yǎng)菌絲，以不添加有機酸的PDB培養(yǎng)液培養(yǎng)菌絲為對照，利用構(gòu)建的液相色譜方法檢測食用菌PDB培養(yǎng)液中有機酸種類和含量隨著培養(yǎng)時間的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不接種未培養(yǎng)菌絲的PDB培養(yǎng)液中含有檸檬酸，酒石酸，己二酸和丁酸，不含草酸、甲酸、莽草酸、延胡索酸、丙酸、異丁酸和馬來酸；三種菌絲

10、培養(yǎng)前后有機酸的種類差別不大，但培養(yǎng)前后有機酸的含量差別很大。不同菌種對同種有機酸的代謝情況不同，不同的有機酸對同種菌種的影響不同，一種有機酸的添加也會影響其他有機酸的變化。有機酸對菌絲生長的影響不僅僅是因為提供的酸性環(huán)境，而是在培養(yǎng)過程中會被菌絲利用。三種有機酸的添加促進菌絲對葡萄糖的利用。
　　5.察氏培養(yǎng)液中有機酸定性定量的分析
　　本研究考慮到 PDB培養(yǎng)基中本有的有機酸可能對生長過程中產(chǎn)生的有機酸定量有一定影響，為