南方鲇生長(zhǎng)激素受體cDNA的分子克隆以及魚類存在兩種生長(zhǎng)激素受體的證明.pdf

1、用RT-PCR加RACE的方法從南方大口鲇中克隆出其生長(zhǎng)激素受體(GHR).當(dāng)利用南方鲇GHR的核苷酸、氨基酸序列Blast東方純的基因組時(shí),發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)contig與其氨基酸序列非常相似,因此意識(shí)到魚類可能存在兩種不同基因編碼的GHR.隨后主要利用已經(jīng)克隆得到的cohoGHR isfl、cohoGHR isf2、chGHR以及其他魚類GHR核苷酸和氨基酸序列Blast東方純的基因組,采用序列拼接的方法從東方純基因組中分離出兩種不同基因編

2、碼的fGHR1和fGHR2(該研究把和傳統(tǒng)GHR相似的叫做GHR1,把另外一種叫做GHR2).同時(shí),我們用相似的方法從斑馬魚的EST序列和其高通量(HTG)基因組序列分離出斑馬魚zfGHR1和zfGHR2.在得到以上GHR序列后,又分析了人、鼠、雞等其他動(dòng)物的基因組,發(fā)現(xiàn)GHR2只存在于魚類,是魚類特有的現(xiàn)象.該研究對(duì)GHR1和GHR2做了詳細(xì)的比較分析.分析比較fGHR1、fGHR2、zfGHR1和zfGHR2的特點(diǎn)發(fā)現(xiàn),他們除了都具

3、有傳統(tǒng)GHR的特點(diǎn)外,GHR1和GHR2又各自區(qū)別開來:具體包括1)GHR的標(biāo)志性特征Y/FGEFS:fGHR1、fGHR2和zfGHR1胞外鉸鏈區(qū)的結(jié)構(gòu)域?yàn)镕GEFS,在zfGHR2該結(jié)構(gòu)域?yàn)镕GDFS.但由于天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)由于性質(zhì)非常相似,因此可以把他們理解為一致的;2)保守的胞外半胱氨酸殘基.在fGHR1和zfGHR1都為7個(gè),數(shù)目和四足動(dòng)物GHR一致;在fGHR2胞外胱氨酸殘基為5個(gè),zfGHR2為4個(gè),和同屬于G

4、HR2的cohoGHR isfl、cohoGHR isr2、chGHR基本保持一致,但是卻和傳統(tǒng)的GHR1有比較大的區(qū)別;3)該試驗(yàn)克隆和分離得到GHR1和6HR2以及所有目前發(fā)表的GHR都有比較保守的Box1結(jié)構(gòu)域,氨基酸組成為PPXPXP,研究表明最后兩個(gè)脯氨酸殘基作用最大;4)在所有GHR中都完全一致的Box2,序列為WVEFI;5)在GHR1和GHR2胞內(nèi)部分都比較保守的酪氨酸殘基,他們被認(rèn)為在信號(hào)傳導(dǎo)中起作用.以上比較分析表明

5、GHR2具有GHR最重要的結(jié)構(gòu),其就是GHR.但他們又有自己獨(dú)特的地方,因而和GHR1分開來,屬于GHR不同的一個(gè)類群.另外一點(diǎn)讓人感興趣的是:該研究在使用了各種方法后都沒有能夠分離出zfGHR1和zfGHR2的跨膜區(qū)和Box1.由于zfGHR1和zfGHR2分別位于不同的基因組contig上,理論上這種巧合發(fā)生的幾率是比較小的.更深入的研究將解釋這種現(xiàn)象發(fā)生的原因.最后,加上我們從尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus