傳染性支氣管炎病毒分離株基因組序列測(cè)定及分子特征研究.pdf

1、本研究通過對(duì)雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）基因序列的分析，設(shè)計(jì)保守引物，同時(shí)結(jié)合RACE5'端測(cè)序的方法，對(duì)IBV的一分離株JH06011進(jìn)行全基因組測(cè)序。JH06011全長(zhǎng)基因組為27，651bp，GC含量38.2％，具有典型的IBV病毒基因編碼特征5'-1a-1b-S(S1，S2)-3a，3b，3c(E)-M-5a，5b-N-Poly(A)-3'，編碼6個(gè)不同基因。通過基因組序列分析，發(fā)現(xiàn)JH06011與四川株SAIBK與SC021

2、202株的同源性較高，分別是94.6％和92.7％，與疫苗株H52、H120的同源性均為89.4％。點(diǎn)突變廣泛分布于結(jié)構(gòu)蛋白和部分非結(jié)構(gòu)蛋白基因的序列中，而插入、缺失主要發(fā)生在基因1 nsp3區(qū)、S基因的高變區(qū)(HVR)。此外，本研究還從山東濰坊某雞場(chǎng)產(chǎn)蛋雞卵巢組織中分離到一株IBV變異株，命名為WF2011，通過設(shè)計(jì)保守引物擴(kuò)增獲得基因2～基因6的基因組序列。同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，WF2011與常見的參考毒株的同源性普遍較低，

3、S1基因的同源性在61.8％到86.0％之間，且與LX4、SAIBK和Mass類型的毒株存在較大的遺傳距離。因此，認(rèn)為WF2011是一株在分子水平上變異程度比較大的IBV變異株。
　　 本研究還對(duì)同一時(shí)期從浙江金華地區(qū)分離到的兩毒株JH06011和JH06111致病性進(jìn)行比較研究，發(fā)現(xiàn)JH06011感染1日齡和7日齡的雛雞死亡率為100％，而JH06111對(duì)這兩個(gè)日齡段的雛雞不致死。JH06011感染的雞腎組織中腎小管上皮細(xì)胞變

4、性、排列松散，而JH06111感染的雞腎組織病變較輕微。對(duì)感染雞腎組織的病毒核酸進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)JH06011 S1基因和M基因的檢出為100％，而JH06111的檢出率分別為71.4％和85.7％，以上結(jié)果表明JH06011的致病性比JH06111強(qiáng)。這兩毒株感染雞的臨床表現(xiàn)、病理變化、組織中病毒載量存在一定的差異。
　　 進(jìn)一步將JH06011和JH06111兩毒株的基因組序列進(jìn)行比較分析。兩毒株的基因組同源性為91