禽傳染性支氣管炎病毒S2和E基因的克隆及序列分析.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究采用RT-PCR對(duì)3株四川分離株IBV進(jìn)行了S2、E基因的擴(kuò)增，并對(duì)3株IBV進(jìn)行了S2、E基因的序列分析。采用SDS-Pro.K法抽提M41標(biāo)準(zhǔn)株及本課題組分離的IBV基因組RNA。根據(jù)Genbank公布的禽傳染性支氣管炎病毒呼吸型標(biāo)準(zhǔn)毒株IBVM41基因組全序列設(shè)計(jì)了擴(kuò)增S2、E基因的兩對(duì)引物。用S2基因的引物對(duì)4株IBVM41、SAIBWS、SAIB4、SAIBWJ進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，均獲得了長(zhǎng)約1.5kb特異條帶(注示

2、：本研究所擴(kuò)S2基因?yàn)椴糠諷2基因)。用E基因的引物對(duì)4株IBVM41、SAIBWS、SAIB4、SAIBWJ進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，均獲得了長(zhǎng)約400bp特異條帶?！　AIBWS、SAIB4、SAIBWJ三株的RT-PCR特異擴(kuò)增條帶插入到PMD18-T質(zhì)粒多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建了含目的基因片段的克隆質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化JM109載體菌，篩選獲得S2、E基因陽(yáng)性克隆菌株。對(duì)S2基因的克隆質(zhì)粒的外源片段序列測(cè)定表明，該片段含有IBVS2基因序列，

3、其基因長(zhǎng)約1437bp，編碼約479個(gè)氨基酸。對(duì)E基因的克隆質(zhì)粒的外源片段序列測(cè)定表明，該片段含有IBVE基因全序列，其基因全長(zhǎng)約330bp，編碼約110個(gè)氨基酸?！　∨cGenbank公布的IBVM41標(biāo)準(zhǔn)株S2基因相比，SAIBWS、SAIB4、SAIBWJS2基因核苷酸序列同源率分別為85.5％、84.4％、84.4％，相應(yīng)的氨基酸序列同源率分別為86.8％、88.7％、81.6％。與Genbank公布的IBVM41標(biāo)準(zhǔn)株E基因相

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