雞傳染性支氣管炎病毒0801株的分離鑒定及S1基因序列分析.pdf

1、雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis，IB）是由冠狀病毒科（Coronaviridae）傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）引起的一種急性高度接觸性傳染病。該病主要侵害雞的呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和泌尿生殖系統(tǒng)，可以引起雛雞死亡，蛋雞產(chǎn)蛋量及蛋品質(zhì)下降，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。IBV突出的特點(diǎn)是血清型眾多，且新的血清型和變異株不斷出現(xiàn)，給本病的防治帶來(lái)很大困難，免疫失

2、敗現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，所以從現(xiàn)地分離株中篩選疫苗株對(duì)控制IB非常重要。IBV的基因組為不分節(jié)段的單股正鏈RNA，編碼三種主要結(jié)構(gòu)蛋白（纖突蛋白S，膜蛋白M和核衣殼蛋白N）及其它蛋白。IBV的S蛋白可以裂解成S1和S2兩個(gè)亞單位。S1是重要的免疫原蛋白，能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體，并且與病毒的組織嗜性有關(guān)。S1基因的點(diǎn)突變、插入、缺失或者重組是IBV產(chǎn)生新血清型，亞型和變異株的主要原因，對(duì)于S1基因的變異與病毒的抗原性的改變之間是否存在一

3、致性尚不清楚。故對(duì)S1基因深入研究具有重要意義。從分子水平研究S1基因的分子結(jié)構(gòu)和遺傳進(jìn)化特點(diǎn)，可以為IB的防控提供可靠的理論依據(jù)。2008年1月，河北滄州某產(chǎn)蛋雞場(chǎng)雞群出現(xiàn)以呼吸道癥狀為主的疾病癥候，并迅速波及全群，少數(shù)幾只出現(xiàn)死亡，死亡率約0.5％。剖檢發(fā)現(xiàn)雞只腎臟腫大，有尿酸鹽沉積，呈“花斑腎”樣，其它臟器器官未見(jiàn)明顯病變。已知該雞群曾按正常程序進(jìn)行接種過(guò)IBV H120疫苗。
　　 本研究收集患病雞只腎臟、氣管等組織，進(jìn)

4、行病毒分離培養(yǎng)。通過(guò)新城疫病毒干擾試驗(yàn)、致雞胚矮小化試驗(yàn)、血凝特性試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)以及分子生物學(xué)試驗(yàn)等證實(shí)分離到的0801株為一株傳染性支氣管炎病毒。交叉中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0801株與Ma5、W93、H120、M41、H52株的關(guān)系系數(shù)R分別為80.7％、67.7％、73.3％、54.0％、70.8％。依據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)（R>80％，兩毒株為同一亞型；25％

5、0801株與疫苗株Ma5、W93、H120、M41、H52株均為同一血清型，其中與疫苗株Ma5株為同一血清型的同一亞型。本文對(duì)0801株S1基因進(jìn)行了序列測(cè)定，并與國(guó)內(nèi)外已發(fā)表參考株S1基因進(jìn)行了比較分析，結(jié)果表明，0801株與當(dāng)前普遍應(yīng)用的Massachusetts型疫苗株H120、H52、Ma5、M41及國(guó)內(nèi)疫苗株W93株核苷酸同源性約為75％，推導(dǎo)氨基酸序列對(duì)比結(jié)果顯示同源性亦約為75％，同時(shí)與Genbank注冊(cè)的Arkansas