四株雞傳染性支氣管炎變異株的分離鑒定及其S1基因的分子特征.pdf

1、雞傳染性支氣管炎病是由冠狀病毒科冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒(InfectiousBronchitis viraas,IBV)引起的雞的一種急性、高度接觸性傳染病。本研究從疑似雞傳染性支氣管炎的瀕死病雞腎臟、腺胃組織采樣，按常規(guī)處理，雞胚接種獲得4株病毒，用1％的胰酶處理病毒后，能夠凝集雞的紅細(xì)胞，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)了典型的冠狀病毒粒子，初步鑒定為雞的傳染性支氣管炎病毒并分別命名為T(mén)X1、TX2、PG3、DB4。隨后取第四代雞胚液進(jìn)行雞胚半

2、數(shù)感染量(EID50)測(cè)定，動(dòng)物回歸試驗(yàn)、血清交叉中和試驗(yàn)和消毒藥殺毒試驗(yàn)。結(jié)果四株IBV EID50分別為T(mén)X1：10<'-5.3> EID50、TX2： 10<'-6.4>EID50、PG3：10<'-4.5> ElD50、DB4：10<'-6.7>EID50，四株毒抗本毒株血清的中和效價(jià)最高(1:512)，TX1、PG3與抗H120血清的中和效價(jià)較高(1:64)，其次為抗H52的血清(1:32)，表明有一定的抗原交叉性，與W93抗

3、血清的中和反應(yīng)性均較低(1:8～1:16)，相關(guān)性較差。四株毒均對(duì)碘伏、84消毒藥敏感，動(dòng)物回歸感染死亡雞腎臟病變明顯，表現(xiàn)腎臟腫大、花斑腎，卡他性支氣管炎。 RT-PCR方法擴(kuò)增4株IBv分離株的S1基因，結(jié)果顯示，S1基因的長(zhǎng)度由1657-1669個(gè)核苷酸組成，編碼552-556個(gè)氨基酸殘基，S基因推導(dǎo)氨基酸切割識(shí)別位點(diǎn)序列分別為T(mén)X1(RRF3、R)、TX2(RRFRR)、DB4(HRRRR)，TX1的識(shí)別位點(diǎn)與參考株均不

4、相同。與國(guó)內(nèi)外18株參考毒S1基因序列分析發(fā)現(xiàn)：分離株與國(guó)內(nèi)疫苗株、國(guó)外變異株及標(biāo)準(zhǔn)株核苷酸、氨基酸同源性均在77％以下，而與國(guó)內(nèi)分離株LX4、JX9901同源性高達(dá)91％以上，與參考毒株的S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析比較顯示，分離株與JX9901、LX4、BJ、IBZ-V國(guó)內(nèi)流行株在第1大群內(nèi)， TX1、TX2與JX9901構(gòu)成該群的第一個(gè)分支，氨基酸同源性在91％～99％之間，DB4與BJ、IBZ-V、LX4構(gòu)成第二個(gè)分支，氨基酸同源性在