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文檔簡介
1、少突膠質細胞是主要的髓鞘形成細胞,它發(fā)出的突起可以包裹軸突,形成一種特殊的結構—髓鞘。作為一種富含脂類的結構,髓鞘的存在對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)電沖動的傳導具有至關重要的作用。此外,少突膠質細胞對神經(jīng)元的再生、軸突的生長也有重要作用。少突膠質細胞在發(fā)育成熟后形成髓鞘的功能離不開細胞內表達的髓鞘特異性蛋白分子,研究這些分子的轉錄調控及表達與分布特點,對于深入認識少突膠質細胞的發(fā)育、分化及髓鞘形成的過程具有重要意義,同時,也能夠為各種脫髓鞘疾病的診
2、斷和治療提供幫助。
Juxtanodin(JN)是近年來新鑒定的一個大鼠少突膠質細胞特異的細胞骨架蛋白分子,其表達于少突膠質細胞發(fā)育后期,參與髓鞘的構成;JN能夠通過與F-actin結合而促進少突膠質細胞形成絲狀偽足;在成年大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)內,JN與少突膠質細胞的另一種標記分子—CNPase共定位。這些研究都是基于成年大鼠進行的,目前尚無關于JN功能的進一步報道,因此研究JN在大鼠生后發(fā)育過程中轉錄調控規(guī)律及表達特點,有望為該
3、分子參與的少突膠質細胞生物學功能提供更多的信息。
本研究在對JN現(xiàn)有研究的基礎上,通過免疫組織化學較為系統(tǒng)地研究了JN在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)生后發(fā)育階段的表達與分布的時空特點。結果表明,在大鼠生后中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中,JN在前腦出現(xiàn)于P7胼胝體的喙部,至P28時其表達水平達到高峰;而在脊髓則出現(xiàn)于P0的灰質,至P14時其表達水平即達到高峰。為了進一步研究JN的轉錄調控機制,我們克隆了該基因上游約1.9kb的啟動子序列,并克隆到報
4、告基因載體pGL3中,通過截短與突變確定了JN的核心啟動子區(qū);我們發(fā)現(xiàn)全反式維甲酸(ATRA)及轉錄因子Nkx2.2能夠上調JN啟動子的活性。在體外實驗中JN啟動子也表現(xiàn)出了一定的膠質細胞選擇性。為了進一步確認我們所克隆的JN啟動子區(qū)的轉錄活性,我們通過電轉的方法將JN啟動子轉入P0仔鼠的腦室,發(fā)現(xiàn)其在體內得到較強的表達,從而證實其具有體內轉錄活性。此外,我們還從人腦組織中鑒定出JN的同源分子hErmin,并對該分子進行了初步的功能研究
5、。我們發(fā)現(xiàn)hErmin在體內與髓鞘特異性蛋白CNPase及MBP共定位,在體外能夠與F-actin結合并促進細胞絲狀突起的生長,這些結果說明hErmin也是一種少突膠質細胞特異的細胞骨架蛋白,很可能參與髓鞘的構成
綜上所述,本研究闡述了JN在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)生后發(fā)育階段的表達與分布規(guī)律,證明了ATRA及轉錄因子Nkx2.2對該基因具有調控作用;我們還在人腦組織中鑒定出JN的同源分子hErmin并證明hErmin也是一種少突膠質
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