雞蛋清中兩組蛋白質(zhì)相互作用及其功能性質(zhì)的研究.pdf

1、本課題開(kāi)展雞蛋清中幾種蛋白質(zhì)相互作用及其對(duì)功能性質(zhì)的研究，實(shí)驗(yàn)選取為卵白蛋白質(zhì)和溶菌酶以及卵白蛋白和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白兩組。采用一系列的實(shí)驗(yàn)依次從定性分析相互作用、二級(jí)結(jié)構(gòu)變化、蛋白質(zhì)功能性質(zhì)變化、抗菌協(xié)同作用測(cè)定以及定量測(cè)定蛋白質(zhì)相互作用動(dòng)力學(xué)常數(shù)測(cè)定進(jìn)行了具體的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)電化學(xué)循環(huán)伏安法和雙偏振極化干涉的方法定性的對(duì)所選取的兩組蛋白質(zhì)進(jìn)行相互作用驗(yàn)證。循環(huán)伏安法中，對(duì)電極表面進(jìn)行修飾。將蛋白質(zhì)依次固定在電

2、極表面。通過(guò)電信號(hào)的變化發(fā)現(xiàn)卵白蛋白和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白，卵白蛋白和溶菌酶兩組蛋白質(zhì)之間均存在有相互作用。雙偏振極化干涉測(cè)定卵白蛋白和溶菌酶的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，經(jīng)過(guò)反應(yīng)過(guò)程芯片表面厚度增加了3.487408nm，質(zhì)量增加為1.625027ng/mm2，密度增加為0.46597g/cm3。卵白蛋白和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)過(guò)反應(yīng)過(guò)程，芯片表面厚度增加了4.783581nm，質(zhì)量增加為1.48436ng/mm2，密度增加為0.310303g/cm3。推斷兩組蛋白質(zhì)的

3、相互作用類(lèi)型均為嵌合型。
　　(2)使用紅外光譜以及圓二色譜的方法對(duì)兩組蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行判定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)48h相互作用之后，蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)中有序的α螺旋和β折疊有所降低，代表無(wú)序結(jié)構(gòu)的無(wú)規(guī)則卷曲程度有所升高。其中使用紅外光譜與圓二色譜所得結(jié)果一致。
　　(3)溶菌酶與卵轉(zhuǎn)鐵蛋白為蛋清中重要的抗菌蛋白質(zhì)，為進(jìn)一步探究蛋白質(zhì)相互作用對(duì)抗菌性能的影響，在上述研究的基礎(chǔ)上，使用熒光倒置顯微鏡與流式細(xì)胞儀的方法對(duì)其抗菌性

4、能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。為確定蛋白質(zhì)抑菌的最佳時(shí)間，首先測(cè)定蛋白質(zhì)條件下生長(zhǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線，得到3h時(shí)混合蛋白質(zhì)的抑菌效果最為明顯，溶菌酶或轉(zhuǎn)鐵蛋白單獨(dú)存在時(shí)，6h的抑菌效果較3h時(shí)更為明顯。在最佳抑菌時(shí)間對(duì)細(xì)菌形態(tài)進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的相互作用對(duì)細(xì)菌的抑制具有協(xié)同作用。流式細(xì)胞儀的結(jié)果與熒光倒置顯微鏡的結(jié)果一致。
　　(4)在上述研究基礎(chǔ)上，對(duì)蛋白質(zhì)之間相互作用進(jìn)行定量測(cè)定，使用表面等離子共振以及等溫量熱滴定的方法測(cè)定兩組蛋白質(zhì)之間相

5、互作用的動(dòng)力學(xué)常數(shù)，得到卵白蛋白與溶菌酶的KA值為498，卵白蛋白與卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的KA值為152，稍低于卵白蛋白與溶菌酶之間的數(shù)值，同時(shí)兩組蛋白質(zhì)的相互作用方式均為快結(jié)合快解離的作用方式，這也意味著兩組蛋白質(zhì)的相互作用都存在有很強(qiáng)的可逆性，而通過(guò)KA值也推斷出二者的相互作用為疏水相互作用。等溫量熱滴定的方法并未出現(xiàn)強(qiáng)烈的熱量變化，這推斷與相互作用的可逆性相關(guān)，同時(shí)出現(xiàn)了嚴(yán)重的基線漂移的現(xiàn)象，這可能與蛋白質(zhì)的自身性質(zhì)或蛋白質(zhì)之間相互作用后的