去痛片及其代謝物在大鼠體內(nèi)的分布研究.pdf

1、目的：
　　1.建立SLE固相支撐液液萃取、GC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)去痛片及其代謝物的方法；
　　2.觀察去痛片及其代謝物在大鼠體內(nèi)的分布；
　　3.觀察去痛片及其代謝物在中毒死亡者體內(nèi)的死后分布。
　　方法：
　　1.方法建立
　　利用去痛片及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)品，建立SLE固相支撐液液萃取，GC-MS/MS法同時(shí)檢測(cè)去痛片及其代謝物。
　　2.標(biāo)本采集
　　16只雄性SD大鼠，分為兩組，每組

2、8只。禁食12h后，經(jīng)口灌服去痛片950mg/kg，A組于1.5h脫臼處死，取心血肝素抗凝、心肌、肺、肝臟、脾、腎、上肢肌肉、下肢肌肉、腦組織置于-20℃待檢。B組于24h脫臼處死，取心血肝素抗凝，并收集24h尿液，置于-20℃待檢。
　　中毒案例樣品2例，來(lái)源于山西醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心。
　　3.提取檢測(cè)
　　待檢生物樣品中添加烯丙基異丙基巴比妥（50μg/mL），氨基比林-13C2（25μg/mL）混合內(nèi)標(biāo)工作液8

3、0μL，經(jīng)SLE固相支撐液液萃取，GC-MS/MS檢測(cè)，MRM模式掃描，利用保留時(shí)間、定量離子與定性離子對(duì)比例定性，內(nèi)標(biāo)法和工作曲線法定量。
　　4.數(shù)據(jù)處理
　　數(shù)據(jù)用SPSS20.0進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差分析。各臟器間含量用Graphpad6.0進(jìn)行Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，各組間用Dunn's檢驗(yàn)多重比較得出統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果，P＜0.05時(shí)，認(rèn)為各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1.空白血液加入去痛

4、片及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)SLE分別用正己烷、二氯甲烷、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯2mL淋洗，結(jié)果乙酸乙酯同時(shí)提取去痛片及其代謝2.GC-MS/MS法可同時(shí)檢測(cè)去痛片及其代謝物，血液、尿液、肝臟加標(biāo)樣品在0.125μg/mL~16.00μg/mL呈線性關(guān)系，血液樣品工作曲線相關(guān)系數(shù)r為0.9896~0.9997，最低檢測(cè)限為0.23ng/mL~14.48ng/mL；尿液樣品工作曲線相關(guān)系數(shù)r為0.995~0.9997，最低檢測(cè)限為0.08

5、ng/mL~4.71ng/mL；肝臟樣品工作曲線相關(guān)系數(shù)r為0.9953~0.9997，最低檢測(cè)限為0.16ng/mL~11.18ng/mL。方法準(zhǔn)確度為79.64％~122.91%，日內(nèi)精密度為0.99%~7.43%，日間精密度為2.19%~10.60%，
　　3.經(jīng)口灌服950mg/kg去痛片，1.5小時(shí)后去痛片及其代謝物在大鼠體內(nèi)的分布：氨基比林血液含量＞上、下肢肌肉含量，P＜0.05。MAA血液、肝臟含量＞下肢肌肉含量，P

6、＜0.05。AA血液、上、下肢肌肉、肝臟、腎臟、心肌含量＞胃壁含量，P＜0.05。FAA和AAA各臟器間含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。非那西丁血液、肺臟、脾臟含量＞肝臟含量，P＜0.05。APAP血液、下肢肌肉、心肌、腎臟、肝臟、脾臟含量＞胃壁含量，P＜0.05。咖啡因血液、肝臟含量＞上、下肢肌肉、腦組織含量，P＜0.05。17X、37X、13X各臟器間含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。苯巴比妥肝臟含量＞脾臟、腦、上、下肢肌肉含量，P＜0.05。
　　經(jīng)口灌

7、服去痛片24h后，血液中MAA、AA含量高于FAA，P＜0.05。非那西丁和APAP，咖啡因和17X、37X、13X間含量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。24小時(shí)尿液中AAA含量高于AM、MAA、FAA，APAP含量高于非那西丁，P＜0.05。咖啡因和其代謝物含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)SLE固相支撐液液萃取，同時(shí)提取生物樣品中去痛片及其代謝產(chǎn)物，乙酸乙酯較正己烷、二氯甲烷、乙醚和甲基叔丁基醚有較高的提取回收率。
　　2

8、.GC-MS/MS法可同時(shí)檢測(cè)生物樣品中去痛片及其代謝產(chǎn)物，利用保留時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜圖定量離子和定性離子對(duì)比例定性，利用內(nèi)標(biāo)物與目標(biāo)物峰面積比值，內(nèi)標(biāo)法和工作曲線法定量。方法回收率高、專屬性強(qiáng)、特異性高、內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)目標(biāo)物檢測(cè)干擾小，方法靈敏度高、準(zhǔn)確度高，可滿足去痛片中毒案例定性、定量的要求，可應(yīng)用于去痛片相關(guān)案例的法醫(yī)學(xué)鑒定實(shí)踐中。
　　3.去痛片及其代謝物在大鼠體內(nèi)的分布不均勻，口服去痛片中毒案例中優(yōu)先選擇胃內(nèi)容物和胃壁作為檢