艾地普林及其代謝物的抗菌活性研究.pdf

1、艾地普林屬于二氨基嘧啶類(lèi)藥物，主要通過(guò)抑制二氫葉酸還原酶的活性抑制四氫葉酸的合成，從而影響細(xì)菌的葉酸代謝。與同類(lèi)藥物甲氧芐啶相比，艾地普林的半衰期長(zhǎng)，表觀分布容積大，且低毒、安全，無(wú)致突變性，具有良好的應(yīng)用前景。然而，艾地普林藥效學(xué)方面的研究較少，且沒(méi)有對(duì)其代謝物的抗菌活性進(jìn)行過(guò)研究。本課題立足本實(shí)驗(yàn)室前期關(guān)于艾地普林合成工藝及殘留消除等研究成果，測(cè)定了艾地普林對(duì)多種動(dòng)物源細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），并對(duì) MI

2、C50、MIC90、MBC50和 MBC90進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，初步制定了抗菌譜；測(cè)定了艾地普林主要代謝物，即N-單脫甲基-ADP（ADP1）、N-雙脫甲基-ADP（ADP2）和3`-羥基-ADP（ADP3）對(duì)其中兩種敏感菌即豬源鏈球菌和雞源沙門(mén)氏菌的抗菌活性；選取豬源鏈球菌，進(jìn)行艾地普林對(duì)豬鏈球菌病的II期臨床治療試驗(yàn)。本研究的完成旨在補(bǔ)充艾地普林藥效學(xué)相關(guān)資料，為該藥的進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　1艾地普林的體外抗菌活性
　

3、　根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）所制定的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，以甲氧芐啶為對(duì)照藥，測(cè)定了艾地普林對(duì)豬、雞、魚(yú)、牛和羊源常見(jiàn)致病菌的MIC和 MBC。由于體內(nèi)病原菌基本處于缺氧甚至無(wú)氧的環(huán)境，因此同時(shí)測(cè)定了有氧條件下和厭氧條件下艾地普林對(duì)兼性厭氧菌的抗菌作用，并進(jìn)行了對(duì)比。抑菌效果相關(guān)參數(shù)表明，艾地普林的抗菌譜與甲氧芐啶相同，對(duì)大多數(shù)的革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌均有較好的抑制作用，為廣譜型抗菌藥物。
　　對(duì)艾地普林較

4、敏感的細(xì)菌包括豬源沙門(mén)氏菌和鏈球菌，雞源大腸桿菌和沙門(mén)氏菌，牛源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、鏈球菌和巴氏桿菌，羊源的鏈球菌、曼氏桿菌,魚(yú)源的大腸桿菌、柱狀黃桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和魯克氏耶爾森菌；中度敏感菌包括副豬嗜血桿菌，牛源和羊源克雷伯氏菌，魚(yú)源金黃色葡萄球菌、腸型點(diǎn)狀氣假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、無(wú)乳鏈球菌；耐藥菌包括豬源大腸桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌，雞源金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和牛源的金黃色葡萄球菌。艾

5、地普林對(duì)所測(cè)敏感菌和中度敏感菌的MBC/MIC在1-4之間，顯示了較好的殺菌活性。
　　在艾地普林的敏感菌和中度敏感菌中，艾地普林與甲氧芐啶對(duì)所測(cè)大部分病原菌的MIC和MBC相等或相差一個(gè)梯度。其中，兩者對(duì)豬源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、鏈球菌，魚(yú)源柱狀黃桿菌的抗菌活性相當(dāng)；艾地普林對(duì)雞源沙門(mén)氏菌，牛源和羊源的曼氏桿菌、鏈球菌、巴氏桿菌，魚(yú)源的大腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、魯克氏耶爾森菌、腸型點(diǎn)狀氣假單胞菌、金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌和無(wú)乳鏈

6、球菌的活性較甲氧芐啶稍強(qiáng)；對(duì)雞源和牛源大腸桿菌的抗菌活性稍弱。
　　從單個(gè)菌株比較，厭氧條件下艾地普林對(duì)所測(cè)兼性厭氧菌的MIC值和MBC值與有氧條件下相等或相差一個(gè)梯度；從每種菌的多株細(xì)菌的MIC50、MBC50、MIC90、MBC90的統(tǒng)計(jì)結(jié)果比較，有氧條件和厭氧條件的這些值均相等，即在有氧條件下和厭氧條件下艾地普林對(duì)兼性厭氧菌的抗菌活性無(wú)明顯的差別，均具有較好的抑菌活性和殺菌活性。因此，該藥無(wú)明顯厭氧選擇活性。
　　2艾

7、地普林主要代謝物的體外抗菌活性
　　通過(guò)艾地普林的體外抗菌活性研究，選取了44株豬源鏈球菌和40株雞源沙門(mén)氏菌，測(cè)定艾地普林主要代謝物，即ADP1、ADP2和ADP3對(duì)這兩種細(xì)菌的MIC和MBC。結(jié)果表明 ADP3對(duì)所測(cè)定的44株豬源鏈球菌和40株雞源沙門(mén)氏菌的MIC和 MBC均大于128μg/mL，沒(méi)有抗菌活性。整體來(lái)說(shuō)，ADP1、ADP2和艾地普林三者對(duì)所測(cè)豬源鏈球菌和雞源沙門(mén)氏菌的MIC50、MBC50、MBC50/MIC5

8、0、MIC90、MBC90和 MBC90/MIC90都相等。其中，對(duì)豬源鏈球菌的MIC50為2μg/mL，MBC50為4μg/mL， MBC50/MIC50為2；MIC90為32μg/mL， MBC90為64μg/mL， MBC90/MIC90=2。對(duì)雞源沙門(mén)氏菌 MIC50為2μg/mL， MBC50為4μg/mL， MBC50/MIC50等于2；MIC90為32μg/mL，MBC90為64μg/mL，MBC90/MIC90等于2。因

9、此，ADP1和 ADP2的抗菌活性與艾地普林相當(dāng)，均具有較強(qiáng)的抑菌活性和殺菌活性。
　　3艾地普林對(duì)豬鏈球菌病的治療試驗(yàn)
　　將60頭體重11-13 kg的斷奶仔豬隨機(jī)分成6組，每組10頭。除空白對(duì)照組不攻毒也不給藥外，其他各組均皮下注射制備好的1010 CFU的鏈球菌 CVCC607。豬鏈球菌疾病模型構(gòu)建成功后，陰性對(duì)照組不給藥，藥物對(duì)照組以30 mg/kg b.w.的劑量肌肉注射復(fù)方磺胺嘧啶鈉，其他三個(gè)組分別以10 mg

10、/kg b.w.、20 mg/kg b.w.和40 mg/kg b.w.的劑量肌肉注射艾地普林，并對(duì)應(yīng)命名為低劑量組、中劑量和高劑量組。各治療組連續(xù)給藥五天，每天給藥兩次，給藥結(jié)束后觀察15天。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)各豬只的精神狀態(tài)、體溫、臨床癥狀進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分。最后根據(jù)各組的死亡率、有效率、治愈率、相對(duì)增重率來(lái)對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)判。
　　給藥治療后，不同組的發(fā)病動(dòng)物的恢復(fù)情況不同。陰性對(duì)照組平均癥狀得分在給藥后的第

11、五天開(kāi)始下降，第十五天時(shí)恢復(fù)正常，但個(gè)別豬只依然出現(xiàn)精神沉郁和咳嗽癥狀；平均直腸溫度在給藥后的第六天后開(kāi)始出現(xiàn)明顯下降，第九天時(shí)恢復(fù)至39.5℃以下。艾地普林高劑量組的豬只體溫在第二天即回復(fù)正常，平均癥狀得分下降至2分以下，從第三天開(kāi)始直至試驗(yàn)結(jié)束均維持在0分；中劑量組豬只的平均體溫在第二天降至正常，癥狀分?jǐn)?shù)在第三天恢復(fù)正常；低劑量組的體溫和平均每頭豬的癥狀分?jǐn)?shù)分別在第三天和第四天恢復(fù)正常，所有治愈豬只在觀察期內(nèi)均無(wú)復(fù)發(fā)。
　　在

12、試驗(yàn)前和試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)各組豬只稱重并進(jìn)行對(duì)比。藥物對(duì)照組的相對(duì)增重率介于高劑量組和中劑量組之間，分別為93.0％、96.5%和91%，三者的相對(duì)增重率無(wú)顯著差異(P＞0.05)；低劑量組的相對(duì)增重率為74.7%，與高劑量組和中劑量組相比有顯著差異(P＜0.05)；而陰性對(duì)照組的凈增重僅為1.77㎏，相對(duì)增重率為34.5%，與高劑量組、中劑量和低劑量組相比較低，呈顯著性差異(P＜0.05)。
　　綜合分析咳嗽、精神狀態(tài)、體溫等癥狀，計(jì)

13、算艾地普林對(duì)豬鏈球菌病的治療效果。陰性對(duì)照組的存活率為70%，高劑量組、中劑量組和低劑量組均無(wú)死亡豬只出現(xiàn)，存活率為100%。其中，高劑量組可達(dá)到100%的有效率和100%的治愈率，中劑量組的有效率和治愈率也均為90%，而低劑量組的有效率為80%，治愈率為70%，說(shuō)明艾地普林各劑量組均可達(dá)到較好的治療效果。由此可得出艾地普林的推薦劑量為20-40mg/kg b.w.，建議以20-40mg/kg b.w.的劑量對(duì)癥狀比較明顯的豬只進(jìn)行治療