ATRQβ-001疫苗對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的及背景：在前期研究中，我們已經(jīng)成功制備了針對(duì)血管緊張素 II受體1型（AT1R）胞外段第二環(huán)的短肽疫苗 ATRQβ-001，該疫苗能夠顯著降低模式動(dòng)物的血壓，具有良好的靶器官保護(hù)作用。大量有關(guān)腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的研究表明，不僅僅在血壓的調(diào)控方面，在動(dòng)脈粥樣硬化的病理進(jìn)展過(guò)程中，RAS也同樣起著十分重要的作用。其中大部分生物效應(yīng)是由血管緊張素II受體1型（AT1R）的激活所介導(dǎo)的。本研究主要評(píng)價(jià)疫苗干預(yù)后的ApoE-/

2、-小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊的病變程度，并與傳統(tǒng)血管緊張素受體阻斷劑（ARB）對(duì)比,深入探究該疫苗對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化保護(hù)作用的機(jī)制以及與傳統(tǒng)化藥的不同作用特性，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供一種新的手段。
　　研究方法：以5周齡雄性ApoE-/-小鼠作為模式動(dòng)物，給予西方飲食，對(duì)比不同干預(yù)方式的作用下（A：ATRQβ-001疫苗免疫組； B：纈沙坦灌胃組； C：Qβ載體免疫組；D：空白對(duì)照組），動(dòng)脈硬化的病變情況。主要包含以下幾個(gè)方面：1.檢測(cè)疫苗免

3、疫后Anti-ATR抗體滴度及維持情況；2.在體水平評(píng)估各干預(yù)組動(dòng)脈粥樣斑塊的病變程度及病理特點(diǎn)，包括油紅染色評(píng)價(jià)斑塊大小，組化及HE染色評(píng)估斑塊穩(wěn)定程度，斑塊區(qū)域炎癥反應(yīng)程度，炎癥因子水平。TUNEL凋亡染色及免疫熒光評(píng)價(jià)凋亡程度，局部區(qū)域巨噬細(xì)胞的極化。放射免疫法測(cè)定RAS激活水平等；3.離體水平評(píng)價(jià)Anti-ATR抗體對(duì)血管緊張素II（AngII）誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡的抑制作用；4.離體環(huán)境下研究Anti-ATR抗體對(duì)巨噬細(xì)胞

4、脂質(zhì)代謝的干預(yù)作用。
　　結(jié)果：1. ATRQβ-001疫苗可以刺激模式動(dòng)物產(chǎn)生高滴度的Anti-ATR抗體，抗體滴度經(jīng)過(guò)3次加強(qiáng)免疫后維持在較高水平，直到實(shí)驗(yàn)研究結(jié)束；2. ATRQβ-001疫苗能有效阻斷 AT1R的激活，減少高脂喂養(yǎng)下 ApoE-/-小鼠的動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，穩(wěn)定粥樣斑塊，降低斑塊區(qū)域炎癥水平（VCAM-1，MCP-1，IL-1β等）及血管凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體（LOX-1）表達(dá)量，減少細(xì)胞凋亡發(fā)生，同

5、時(shí)，可以促進(jìn)斑塊區(qū)域內(nèi)巨噬細(xì)胞向M2型方向分化；3.在離體環(huán)境下，Anti-ATR抗體可以減少由AngII誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，抑制巨噬細(xì)胞對(duì)氧化性低密度脂蛋白的內(nèi)吞酯化，促進(jìn)攝取脂質(zhì)的水解排出；4.與化藥組相比，ATRQβ-001疫苗組在有效阻斷AT1R的同時(shí)，沒(méi)有反饋激活循環(huán)中的RAS。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，疫苗組動(dòng)物未見(jiàn)明顯免疫性損傷表現(xiàn)（心、腎病理切片），疫苗的安全性得到初步驗(yàn)證。
　　總結(jié)：ATRQβ-001疫苗可以有效減少高脂