魚糜制品中大豆蛋白的檢測.pdf

1、簍萎大學碩士學位論文魚糜制品中大豆蛋白的檢測Detectionofsoybeanproteinsinsurimiproducts魚糜制品中大豆蛋白的檢測摘要近年來，隨著魚糜制品產量的不斷增加，魚糜原料價格的不斷上漲，向魚糜制品甚至原料魚漿中添加價格較低的大豆蛋白代替魚肉蛋白的現(xiàn)象經常出現(xiàn)，嚴重損害了消費者的權益。本研究以大豆蛋白中熱穩(wěn)定性良好的大豆胰蛋白酶抑制劑(Soybeantrypsininhibitor，STI)及p伴大豆球蛋白的

2、p亞基為目標蛋白，制備抗體并建立高效靈敏的大豆蛋白檢測方法，為魚糜制品中大豆蛋白檢測試劑盒的研發(fā)提供技術支持。大豆粉通過丙酮浸泡、酸處理、硫酸銨鹽析、DEAE—Sephacel及SPSepharose離子交換層析柱的純化，最終獲得高純度的STI。將STI經110℃處理30min后作為抗原，免疫新西蘭雄兔(從小喂養(yǎng)不含大豆蛋白的飼料)，制備抗STI多克隆抗體。通過免疫喂養(yǎng)不含大豆蛋白飼料的BALB／c小鼠制備了1種單克隆抗體(A116)。

3、并分別采用ProteinASepharose及ProteinGSeplaarose柱層析法對抗體進行純化。分別將制備的多克隆抗體及單克隆抗體進行大豆蛋白免疫檢測方法的構建。以抗STI多克隆抗體建立的cELISA法，最低檢測限為24nagSPI／kg食物，對含5、10、20mg／g大豆分離蛋白的魚漿進行回收率分析，回收率為76O％～109O％。利用抗STI單克隆抗體(A116)建立的傳統(tǒng)的Westernblot法及免疫熒光法最低檢測限分別

4、為50mgSPI／kg食物、1875mgSPI／kg食物。兩種方法均能對魚糜制品中大豆進行半定量分析，但傳統(tǒng)的Westernblot法的靈敏度比免疫熒光法高，而免疫熒光法具有耗時短、安全等特點。對傳統(tǒng)的Westernblot法的檢測準確度進行分析，回收率為819％一一987％。同時，以A116為包被抗體、抗STI多克隆抗體為檢測抗體，建立s—ELISA法，最低檢測限為136mgSPI／kg食物，定量限(LOQ)為617mgSPI／kg食

5、物。通過對魚丸及魚漿中的大豆蛋白進行檢測，回收率為1001％1222％，說明建立的sELISA法準確性高。本研究根據(jù)建立的sELISA法成功開發(fā)了魚糜制品中大豆蛋白定量檢測試劑盒。另一方面，通過等電點沉淀和QSepharose陰離子交換層析柱的純化，從大豆中得到高度純化的48kDa的蛋白質。經質譜分析得到9個肽段，共175個氨基酸，與大豆中的B伴大豆球蛋白的B亞基同源性為100％，說明純化的蛋白為B伴大豆球蛋白的B亞基。以該目標蛋白分別