蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的化學(xué)合成及活性研究.pdf

1、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)作為蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)家族中的一員，是一類信號(hào)傳導(dǎo)酶，胰島素信號(hào)的調(diào)節(jié)可通過(guò)胰島素受體底物-1(IRS-1)和胰島素受體底物-2(IRS-2)的脫磷酸化作用而實(shí)現(xiàn)，有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，將PTP1B基因敲除可使小鼠體重不增長(zhǎng)，因此，PTP1B作為胰島素的負(fù)調(diào)控因子在信號(hào)傳導(dǎo)方面的作用，目前已成為公認(rèn)的治療Ⅱ型糖尿病和肥胖癥的作用靶點(diǎn)。
　　從海藻中提取的鹵代苯酚化合物，通常具備多樣的生物活性，如細(xì)

2、胞毒素活性，抗菌活性，抗氧化活性，抗腫瘤活性等。本課題組成員通過(guò)對(duì)該類化合物結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，小分子鹵代苯酚類化合物通過(guò)雜環(huán)化合物（如2，4-噻唑烷二酮、海因，結(jié)構(gòu)如下）結(jié)構(gòu)修飾，能夠?qū)TP1B的活性產(chǎn)生較為明顯的抑制性。本文擬以此類化合物為先導(dǎo)物，合成一系列結(jié)構(gòu)類似的溴代苯酚雜環(huán)化合物。
　　1、溴代苯酚化合物的合成。結(jié)合參考文獻(xiàn)對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行了摸索，設(shè)計(jì)出較為合理的路線。產(chǎn)率達(dá)到70％以上，完成了對(duì)目標(biāo)化合物的合成，并對(duì)合成的化

3、合物經(jīng)過(guò)1H-NMR、13C-NMR、DEPT譜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，并證實(shí)了所合成化合物結(jié)構(gòu)的正確性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該合成方法不僅產(chǎn)率較高，而且后處理較為簡(jiǎn)單，少數(shù)化合物通過(guò)硅膠柱的分離能夠得到所需結(jié)構(gòu)的目標(biāo)化合物。
　　2、酶活力測(cè)定方法的建立與抑制活性的測(cè)定。通過(guò)對(duì)PTP1B的Time-course曲線、最適pH、底物（pNPP）濃度對(duì)反應(yīng)速率曲線的測(cè)定以及Lineweaver-Burk雙倒數(shù)曲線的繪制，得出如下結(jié)論:PTP1B的

4、反應(yīng)速率（以t-OD作圖得到的曲線斜率）只在最初一段時(shí)間內(nèi)保持恒定，隨后反應(yīng)速度逐漸下降，最后趨于平衡;選反應(yīng)前3 min來(lái)表示PTP1B的活性為0.156 OD/min; PTP1B的最適pH值為6.5。以％Inhibition值作為化合物抑制能力的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，即固定PTP1B-底物的反應(yīng)體系，改變化合物的濃度，將反應(yīng)前3 min的OD405值與未加化合物的體系對(duì)比。對(duì)合成的12個(gè)化合物進(jìn)行了抑制活性的測(cè)定，結(jié)果表明，有2個(gè)抑制活性較好

5、的化合物，分別為5-(5，6-二溴-3甲氧基-4-羥基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮、5-(5，6-二溴-3甲氧基-4-羥基苯亞甲基)-2，4-咪唑烷二酮，其％Inhibition值分別為32.80、27.79。
　　3、體外PTP1B酶抑制活性測(cè)定及構(gòu)效關(guān)系研究。米氏常數(shù)的測(cè)定，隨著底物pNPP濃度的增加反應(yīng)速率逐漸增加，在pNPP達(dá)16mM以上時(shí)，反應(yīng)速率基本趨于最大值，米氏常數(shù)Km為1.4 mM，并測(cè)定了陽(yáng)性抑制劑釩酸鈉和化