基于水稻黃單胞菌拓?fù)洚悩?gòu)酶IV ParE亞基的殺菌劑合成.pdf

1、水稻白葉枯病(Bacterial leaf blight, BLB)是一種重要的世界性水稻細(xì)菌病害，其病原菌為水稻黃單胞菌致病變種，水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. Oryzae, Xoo)。傳統(tǒng)防治藥劑噻枯唑的藥效并不理想，亟待開(kāi)發(fā)新型藥劑。
　　拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topoisomerase)可通過(guò)斷裂與接合DNA單鏈或雙鏈，使DNA在多種拓?fù)錁?gòu)型之間轉(zhuǎn)變。以細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶標(biāo)的抑制劑作用機(jī)制主要分為兩類

2、：(1)作用于酶的催化位點(diǎn)，與酶-DNA形成復(fù)合物；(2)作用于酶的ATP結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)抑制ATP水解實(shí)現(xiàn)酶抑制活性。
　　本論文采用計(jì)算機(jī)輔助藥物分子設(shè)計(jì)的方法，以水稻黃單胞菌Xoo的拓?fù)洚悩?gòu)酶IV ParE亞基為受體，結(jié)合文獻(xiàn)中報(bào)道的細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑骨架，進(jìn)行基于分子對(duì)接的虛擬篩選，設(shè)計(jì)合成了一系列N-苯乙基-1-(9H-嘌呤-6-取代)哌啶-4-甲酰胺衍生物。
　　以化合物A-1為例，探索了兩種不同的方法合成目標(biāo)化

3、合物。(1)以4-哌啶甲酸為原料，通過(guò)Boc保護(hù)、酸胺縮合、脫Boc得到關(guān)鍵中間體N-取代-哌啶-4-甲酰胺(II)，再與取代嘌呤反應(yīng)得到目標(biāo)化合物；(2)以4-哌啶甲酸為原料，與取代嘌呤反應(yīng)，得到1-(9H-嘌呤-6-取代)哌啶-4-甲酸(IA)，最后與不同的胺縮合得到目標(biāo)化合物。使用苯乙胺、取代苯乙胺等，方案二收率較高；使用取代苯胺時(shí)，方案一收率較高。所有目標(biāo)化合物均經(jīng)1H NMR、13C NMR、MS等進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證。
　　

4、采用濁度法，測(cè)試了目標(biāo)化合物對(duì)水稻白葉枯病菌、柑橘潰瘍病菌、煙草青枯病菌、金黃色葡萄球菌的抑制活性。結(jié)果表明，在200和100μg/mL濃度條件下，目標(biāo)化合物對(duì)柑橘潰瘍病菌具有一定的抑制活性，其中A-5(75.0±1.7％,73.1±6.8%), B-4(97.2±5.6%,55.8±0.2%)和B-6(75.4±1.0%,60.6±3.4%)的抑制活性高于對(duì)照藥劑新生霉素(48.5±4.0%,36.9±4.4%)?；衔飳?duì)水稻白葉枯病

5、菌、煙草青枯病菌、金黃色葡萄球菌未表現(xiàn)出明顯抑制活性。
　　并測(cè)試了目標(biāo)化合物的抗植物病原真菌、植物病毒及抗癌活性。結(jié)果表明，化合物在500μg/mL濃度條件下對(duì)煙草花葉病毒具有較好的活體治療活性，其中A-9(56.7±2.1%)的活體治療活性優(yōu)于對(duì)照藥劑寧南霉素(51.3±1.8%)。目標(biāo)化合物對(duì)A549細(xì)胞(人肺腺癌細(xì)胞)也表現(xiàn)出了良好的體外增殖抑制活性，在1μM、10μM濃度條件下，A-1(81.1±3.2%,60.8±5.