水溶性不對(duì)稱吲哚菁染料的合成、光學(xué)性能及生物標(biāo)示.pdf

1、目的:吲哚菁染料具有光譜范圍廣(550 nm-1200 nm)、熒光量子產(chǎn)率高和檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于熒光探針、蛋白質(zhì)標(biāo)示、DNA測(cè)序和細(xì)胞染色等方面。我們?cè)O(shè)計(jì)在吲哚“N”位引入非離子型水溶性樹杈PEG醚鏈，得到擁有產(chǎn)率更高、水溶性更好、光學(xué)性質(zhì)更加優(yōu)良等特點(diǎn)的新型水溶性不對(duì)稱吲哚菁染料。
　　方法:吲哚菁染料一般通過(guò)三個(gè)步驟合成得到，首先:通過(guò)Fisher反應(yīng)得到堿性雜環(huán);其次:堿性雜環(huán)與烷基化試劑反應(yīng)得到季銨鹽;

2、最后:縮合劑與帶有活性甲基的季銨鹽反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物?；撬峄诫隆?duì)甲苯磺酰氯和聚三乙二醇等為原料合成得到一種新型水溶性不對(duì)稱吲哚五甲川菁染料Cy5-671和一種新型水溶性不對(duì)稱吲哚三甲川菁染料Cy3-567。由磺酸基苯肼和對(duì)溴甲基苯甲酸等為原料合成得到一種吲哚五甲川菁染料Cy5-668。利用紫外可見分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)測(cè)定了產(chǎn)物的光學(xué)性質(zhì);吲哚菁染料經(jīng)過(guò)琥珀酰亞胺酯活化后與牛血清白蛋白或羊抗小鼠IGg進(jìn)行了標(biāo)示實(shí)驗(yàn);同時(shí)把Cy5-

3、671和Cy5-668的性質(zhì)進(jìn)行了對(duì)比。
　　結(jié)果:我們總共合成十余種中間產(chǎn)物，最終得到了三種水溶性不對(duì)稱吲哚菁染料，其結(jié)構(gòu)都經(jīng)1HNMR和MS確認(rèn)。Cy5-671的最大吸收波長(zhǎng)為657 nm，消光系數(shù)為1.6105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長(zhǎng)671 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.24; Cy5-668的最大吸收波長(zhǎng)為650 nm，消光系數(shù)為1.4105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長(zhǎng)668 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.10; Cy

4、3-567的最大吸收波長(zhǎng)為559 nm，消光系數(shù)為0.8105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長(zhǎng)567 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.06; Cy5-671在水中的光穩(wěn)定明顯高于Cy5-668;Cy5-671標(biāo)記牛血清白蛋白的D/P值1.96，Cy5-668標(biāo)記牛血清白蛋白的D/P值1.57，Cy3-567標(biāo)記牛血清白蛋白的D/P值1.59。
　　結(jié)論:新型水溶性不對(duì)稱吲哚五甲川吲哚菁染料Cy5-671在吲哚“N”位引入非離子型水溶性樹