魚精蛋白對金黃色葡萄球菌生物膜干預(yù)作用的初步研究.pdf

1、魚精蛋白作為醫(yī)藥和食品領(lǐng)域具有開發(fā)和應(yīng)用潛力的天然抑菌劑，近年來日益受到人們的關(guān)注。本文通過對金黃色葡萄球菌生物膜的構(gòu)建，以魚精蛋白作為抑菌劑，研究它對金黃色葡萄球菌生物膜的干預(yù)作用，并探討其對PIA合成和eDNA分泌的影響，為食品及醫(yī)藥領(lǐng)域中預(yù)防金黃色葡萄球菌存在的安全隱患提供新的途徑，并為進一步研究魚精蛋白的作用機制奠定基礎(chǔ)。本論文得到了以下結(jié)果:
　　1.通過剛果紅平板實驗證實了受試的金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生生物膜，然后在24

2、孔細胞培養(yǎng)板中，以普通蓋玻片為載體，孵育金黃色葡萄球菌在玻片上形成生物膜。對生物膜菌落計數(shù)發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，膜內(nèi)活菌數(shù)不斷增多，到第3天時達到最大值，而后活菌數(shù)明顯降低，第4至6天菌落數(shù)沒有顯著差異，繼續(xù)培養(yǎng)膜內(nèi)活菌數(shù)又開始下降。通過結(jié)晶紫染色觀察黏附菌，銀染法觀察胞外多糖蛋白復(fù)合物，并結(jié)合菌落計數(shù)，可以發(fā)現(xiàn)細菌生物膜中的活菌數(shù)與被膜量變化并不一致。
　　2.從初始加入魚精蛋白對金黃色葡萄球菌生物膜形成的影響，及其對成熟生

3、物膜的影響這兩個方面進行研究，探討魚精蛋白對生物膜形態(tài)及膜內(nèi)活菌數(shù)的影響。結(jié)果如下:魚精蛋白對受試金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度MIC為125μg/mL，最低殺菌濃度MBC為1000μg/mL。培養(yǎng)初始魚精蛋白濃度為4MIC時，各天膜內(nèi)活菌數(shù)均急劇下降，玻片上也基本不見成團的生物膜。當(dāng)培養(yǎng)開始前添加魚精蛋白至MBC濃度，即8MIC（1000μg/mL）時，玻片上活菌數(shù)均為零。魚精蛋白對成熟的生物膜中細菌也有不同程度的殺滅效果，且存在濃度依

4、賴關(guān)系，其滅菌及清除生物膜的效果與培養(yǎng)的時間和魚精蛋白的濃度有關(guān)。培養(yǎng)了5天的生物膜對魚精蛋白更敏感，4MIC就能將膜內(nèi)細菌傘部殺死。相比生物膜形成之后再用魚精蛋白處理，初始加入魚精蛋白能更好地減少生物膜形成。
　　3.采用熒光增白劑標記金黃色葡萄球菌生物膜中的胞外多糖，然后用熒光顯微鏡觀察其分布，結(jié)果表明:魚精蛋白能明顯抑制金黃色葡萄球菌生物膜的黏附菌產(chǎn)生胞外多糖。培養(yǎng)開始前加入魚精蛋白的量越大，對黏附菌產(chǎn)生胞外多糖的抑制作用越

5、明顯。當(dāng)生物膜已經(jīng)形成時再用魚精蛋白干預(yù)，此時需要更大量的魚精蛋白(＞4MIC)才能對黏附菌產(chǎn)胞外多糖發(fā)生顯著的抑制作用，且與生物膜培養(yǎng)的時間有關(guān)。通過蒽酮法定量測定胞外多糖發(fā)現(xiàn)，初始及中途加入魚精蛋白，均能夠顯著降低金黃色葡萄球菌產(chǎn)水溶性、水不溶性胞外多糖的能力。研究還發(fā)現(xiàn)，生物膜形成初期合成更多的水溶性胞外多糖，而繼續(xù)培養(yǎng)生物膜過程中，則合成更多的水不溶性胞外多糖。
　　4.初始加入＞1MIC的魚精蛋白時，通過Dotblott