萬古霉素誘導(dǎo)金黃色葡萄球菌生物膜形成及機(jī)制研究.pdf

1、目的：萬古霉素是治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染的首選藥物。近年來，隨著萬古霉素臨床應(yīng)用增加，其敏感性逐漸減低，導(dǎo)致感染持續(xù)存在。異質(zhì)性萬古霉素中介金黃色葡萄球菌（hVISA，其表型敏感，但也存在耐藥亞群）的存在與持續(xù)性感染以及萬古霉素治療失敗高度相關(guān)，但其具體機(jī)制尚不清楚。本研究通過將一株臨床分離的hVISA菌株10827用不同濃度梯度的萬古霉素進(jìn)行體外誘導(dǎo)，并檢測原代菌株與系列誘導(dǎo)菌株的生物膜形成能力及其生物膜形成相關(guān)基

2、因的mRNA量，初步探討萬古霉素誘導(dǎo)金黃色葡萄球菌生物膜形成及其機(jī)制。
　　方法：
　?。?）將一株臨床菌株（菌株編號(hào)：10827，MIC為2μg/ml，經(jīng)過宏量E-test方法證實(shí)其為hVISA）用不同濃度梯度的萬古霉素進(jìn)行連續(xù)傳代誘導(dǎo)，用E-test方法檢測菌株的MIC值；
　?。?）使用比色法檢測所有菌株的生長情況；
　?。?）使用微量平板法檢測原代菌株及其系列誘導(dǎo)菌株的生物膜形成能力；
　　（4）使

3、用掃描電鏡觀察生物膜的微觀結(jié)構(gòu)；
　?。?）采用熒光定量PCR方法檢測生物膜形成相關(guān)基因的mRNA量。
　　結(jié)果：
　　（1）10827菌株通過體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)獲得了一系列MIC值遞增的同源性菌株，根據(jù)萬古霉素的MIC值，分別命名為10827-V8、10827-V16和10827-V32；
　?。?）系列誘導(dǎo)菌株與原代菌株相比，隨著萬古霉素MIC值的升高，細(xì)菌的生長速度逐漸降低，生物膜形成能力逐漸增強(qiáng)；
　　（

4、3）掃描電鏡顯示隨著萬古霉素MIC值的升高，細(xì)菌相互聚集成團(tuán)，出現(xiàn)小梁狀生物膜結(jié)構(gòu)以及粗糙的細(xì)胞表面；
　?。?）系列誘導(dǎo)菌株與原代菌株相比，隨著萬古霉素MIC值的升高，fnbA、icaA、atlA和sarA基因的的mRNA量逐漸增加，icaR基因的mRNA量逐漸減低。
　　結(jié)論：
　　（1）萬古霉素可以在體外誘導(dǎo)hVISA菌株的耐藥性增強(qiáng)，并且在誘導(dǎo)過程中，細(xì)菌的生物膜形成能力逐漸增加；
　?。?）在萬古霉素誘