吲哚咔唑類生物堿產(chǎn)生菌種選育及代謝調(diào)控.pdf

1、迄今為止放線菌仍然是藥物開(kāi)發(fā)的重要來(lái)源，海洋放線菌因其獨(dú)特的生存環(huán)境而進(jìn)化出獨(dú)特復(fù)雜的代謝途徑，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣、有特殊生理活性和潛在藥用價(jià)值的代謝產(chǎn)物。本文對(duì)實(shí)驗(yàn)室所保藏的具藥用活性的海洋放線菌建立信息庫(kù)，針對(duì)65株活性海洋放線菌，通過(guò)培養(yǎng)觀察菌株的傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)特征，生理生化試驗(yàn)測(cè)試，同時(shí)對(duì)16S rDNA序列測(cè)定和比對(duì)分析，最終結(jié)合三方面信息將活性菌株鑒定到種屬。建立藥用微生物資源信息庫(kù)，詳細(xì)闡述菌株的宿主、采集時(shí)間、采集地點(diǎn)、學(xué)

2、名、16S rDNA序列、活性指標(biāo)與生理生化特性、培養(yǎng)條件、保藏條件等，并加入菌株的菌落特征照片和菌體的顯微結(jié)構(gòu)照片。所有藥用活性海洋放線菌，分屬于7個(gè)屬，48個(gè)種;其中鏈霉菌屬59株，占總量的90.77％。
　　藥用放線菌信息庫(kù)所保藏的硝孢鏈霉菌CQT14-24（簡(jiǎn)稱T14-24），產(chǎn)生具強(qiáng)抗腫瘤活性的吲哚咔唑類化合物，但產(chǎn)量低且因無(wú)特異性而毒性較大。為了提高吲哚咔唑類化合物的產(chǎn)量和獲得該化合物的衍生物，以T14-24為出發(fā)菌株

3、進(jìn)行菌株選育和微生物誘導(dǎo)調(diào)控。經(jīng)過(guò)紫外誘變、紫外線氯化鋰誘變和亞硝酸處理，根據(jù)生物學(xué)特征挑選菌株，通過(guò)稻瘟酶模型初篩、高效液相色譜復(fù)篩、遺傳穩(wěn)定性測(cè)試，以吲哚咔唑產(chǎn)量為指標(biāo)，篩選得到一株高產(chǎn)菌株5-L25-1，其代謝吲哚咔唑的能力比原始菌株提高342.28％。針對(duì)高產(chǎn)菌株5-L25-1開(kāi)展原生質(zhì)體融合試驗(yàn)，優(yōu)化原生質(zhì)體再生條件為:甘氨酸濃度1.0％，蔗糖濃度0.3M，酶濃度2mg/mL，酶解溫度37℃。改變高產(chǎn)菌株5-L25-1的氮源及