一種基于HMBS SYBR Green--qPCR的鳥(niǎo)類DNA內(nèi)源性內(nèi)部控制系統(tǒng)的建立及應(yīng)用.pdf

1、靜燃生碩士學(xué)位論文(全目制學(xué)術(shù)學(xué)位)學(xué)號(hào)—M15—0699密級(jí)——一種基于HMBSSYBRGreen—qPCR的鳥(niǎo)類DNA內(nèi)源性內(nèi)部控制系統(tǒng)的建立及應(yīng)用王瑤瑤指導(dǎo)教師姓名：至盛盟塾撞：塹劌盤莖：蘭蒸塹型：22三QQ2申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：塑學(xué)科專業(yè)名稱：亟墮?？秣c論文提交日期：2Q!魚(yú)主壘旦論文答辯日期：2Q!魚(yú)生魚(yú)旦學(xué)位授予單位：塹；!：!i盤鱟學(xué)位授予日期：2Q!魚(yú)生互旦答辯委員會(huì)主席：旦壘鹽研究量2018年6月2碩士學(xué)位論文江蘇省10％，

2、湖北省16％，西藏0％；江蘇省粘菌素耐藥基因mcr—J陽(yáng)性檢出率最高為762％，其次為云南省757％，福建省328％，山東省34％，湖北省0％，西藏O％。HMBSSYBRGreen—qPCR方法監(jiān)測(cè)結(jié)果表明：山東、江蘇、云南三個(gè)省份樣本中的HMBS基因的陽(yáng)性率均為100％，HMBS基因的平均拷貝數(shù)分別為10515士o97[8D]／swab、10459土035[SDJ／swab和10457土o49[8D]／swab，相比較，來(lái)自湖北、福建

3、省和西藏的樣品中分別有2個(gè)、15個(gè)和11個(gè)未檢測(cè)到HMBS基因，HMBS基因的平均拷貝數(shù)分別為10359士o39[8D]／swab、10384土069isD]／swab和10301士111[sDl／swab，因此，不同采樣者的采樣方式會(huì)影響采集樣本核酸的質(zhì)量，進(jìn)而影響病原體和耐藥基因的檢出率。本研究所建立的內(nèi)部控制系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)鳥(niǎo)類臨床樣本中核酸的質(zhì)量，篩選出不合格的樣品，顯著地降低了PCR檢測(cè)的假陰性率。3一種基于HMBSSYBR

4、GreenqPCR的鳥(niǎo)類DNA內(nèi)源性內(nèi)部控制系統(tǒng)的驗(yàn)證為了證明該系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)樣本中核酸的質(zhì)量，在本項(xiàng)研究中，用禽流感病毒感染20只SPF雞，采用三種采樣方法(充分、適中、輕微)采集咽喉拭子，采集的拭子樣本保存在三種保護(hù)液(DNA／RNA核酸穩(wěn)定劑、1xPBS、四種抗生素混合液)中，另外，將這些樣品分別置于室溫(0天，3天和9天)，隨后對(duì)所有樣本進(jìn)行HMBSSYBRGreen—qPCR檢測(cè)，以及禽流感病毒的PCR檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明：

5、1)充分采集的樣本HMBS基因檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，H9N2AIV檢測(cè)出的陽(yáng)性率為90％。2)適中和輕微采集樣本的HMBS基因的陽(yáng)性率為分別為50％和20％，H9N2AIV檢測(cè)出的陽(yáng)性率分別為50％矛D0％。在三種樣本保護(hù)液中，DNA／RNA核酸穩(wěn)定劑的效果最好，室溫儲(chǔ)存9天內(nèi)對(duì)樣本中H9N2AIV的檢出率無(wú)影響，樣本在另外兩種保護(hù)液中室溫儲(chǔ)存3天或3天以上，對(duì)樣本核酸質(zhì)量和病原體陽(yáng)性檢出率的影響差異性顯著。實(shí)驗(yàn)證明：采樣方法、樣品保護(hù)液和