基于自誘導(dǎo)仿生礦化固定化蛋白酶的研究.pdf

1、在室溫、常壓、中性pH的條件下,將仿生礦化過程用于蛋白酶的固定化,不僅為酶固定化技術(shù)提供了新的途徑,而且進(jìn)一步拓寬了仿生礦化的應(yīng)用。本論文將仿生礦化過程用于菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶固定化,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　研究了菠蘿蛋白酶自誘導(dǎo)仿生鋯化固定化的過程?？疾炝瞬煌蛩貙潭ɑЧ挠绊?得到了固定化菠蘿蛋白酶的最優(yōu)條件:0.2 mol·L-1前驅(qū)體K2ZrF6,6 mg·mL-1菠蘿蛋白酶,前驅(qū)體與菠蘿蛋白酶的體積比為1:2

2、,磷酸鹽緩沖液 pH7.5,濃度為0.1 mol·L-1,在最優(yōu)條件下,固定化酶的酶活約為4 U·mg-1,酶活回收率約為60％,包埋率約為63%。游離和固定化菠蘿蛋白酶最適pH分別為7.0和7.5,最適溫度分別為50℃和55℃,最適pH和溫度下,固定化酶的酶活約為11 U·mg-1,同時(shí)固定化菠蘿蛋白酶的 pH、溫度、儲(chǔ)存和重復(fù)使用穩(wěn)定性均有所提高。對其動(dòng)力學(xué)常數(shù)的研究表明,經(jīng)自誘導(dǎo)仿生鋯化固定化后的菠蘿蛋白酶與底物的親和能力因空間位

3、阻而有所減弱?？疾炝瞬煌潭ɑ瘲l件對菠蘿蛋白酶誘導(dǎo)合成氧化鋯的作用,闡述了菠蘿蛋白酶在誘導(dǎo)合成氧化鋯過程中的作用。
　　研究了木瓜蛋白酶自誘導(dǎo)仿生鋯化固定化的過程?？疾炝瞬煌蛩貙潭ɑЧ挠绊?在最優(yōu)條件下,木瓜蛋白酶的酶活約為18 U·mg-1,酶活回收率約為43%,包埋率約為73%。游離酶和仿生鋯化固定化木瓜蛋白酶最適pH分別為6.5和7.0,最適溫度均為55℃,在最適pH和溫度下,固定化酶的酶活約為23 U·mg-1,同

4、時(shí)固定化木瓜蛋白酶顯示出了良好的 pH、溫度、儲(chǔ)存和重復(fù)使用穩(wěn)定性。對動(dòng)力學(xué)常數(shù)進(jìn)行研究,得到游離和固定化酶的Km分別為2.17和3.47 mg·mL-1,最大反應(yīng)速度分別為44.84和72.99 mg·mL-1·min-1,對比知立體阻礙限制了固定化木瓜蛋白酶的底物親和能力。考察了不同固定化條件對木瓜蛋白酶誘導(dǎo)合成氧化鋯的作用,并初步探討木瓜蛋白酶自誘導(dǎo)仿生鋯化過程的機(jī)理。
　　研究了木瓜蛋白酶自誘導(dǎo)仿生鈦化固定化的過程。考察了

5、不同因素對固定化效果的影響,得到了固定化木瓜蛋白酶的最優(yōu)條件:前驅(qū)體Ti-BALDH濃度為0.25 mol·L-1,木瓜蛋白酶濃度為18 mg·mL-1,Ti-BALDH與木瓜蛋白酶的體積比為1:3,磷酸鹽緩沖液pH6.5,濃度為0.06 mol·L-1,固定化酶的酶活回收率約為42%,包埋率約為56%。固定化木瓜蛋白酶最適pH和最適溫度分別7.0和55℃,與游離酶相比,固定化木瓜蛋白酶的溫度穩(wěn)定性得到了顯著性提高。考察了不同固定化條件