1140.固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質(zhì)研究

1、分類號：學(xué)校代碼：10069密級：研究生學(xué)號：120140191固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質(zhì)研究固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質(zhì)研究ResearchesonHighefficientPreparationbyMicrowaveMethodacterizationofImmobilizedTrypsin研究生姓名：劉偉華專業(yè)名稱：食品科學(xué)指導(dǎo)教師姓名：姜子濤教授論文提交日期：2017年5月學(xué)位授予單位：天津商業(yè)大學(xué)I摘要固

2、定化酶技術(shù)是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一種為克服游離酶穩(wěn)定性能差、成本高、產(chǎn)物純度低等缺點(diǎn)而應(yīng)運(yùn)而生的一種技術(shù)，固定化酶已在許多領(lǐng)域顯示出重要的應(yīng)用價(jià)值。但是固定化酶的制備過程通常耗時較長，少則幾個小時，多則幾十個小時?，F(xiàn)今，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對生活質(zhì)量的要求越來越高，費(fèi)時、繁雜的方式和方法不斷被淘汰，快速測定技術(shù)迅猛發(fā)展，人們的生產(chǎn)生活方式越來越快捷。因此探索高效制備固定化酶的方法，以滿足生產(chǎn)、應(yīng)用的需求是必要的。近年來，微波作

3、為一種高效的輔助手段被廣泛地應(yīng)用到科研之中。但目前為止，國內(nèi)外對微波輔助固定化酶的研究相對較少，且還沒有對胰蛋白酶進(jìn)行微波固定化的研究。因此本課題采用微波固定化的方法來制備固定化胰蛋白酶。本課題研究包括以下四個部分：（1）以ES105環(huán)氧基樹脂為固定化胰蛋白酶的載體，在微波輔助的條件下，對胰蛋白酶進(jìn)行固定化，應(yīng)用BoxBehnken響應(yīng)面法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化確定了最佳的固定化條件。結(jié)果表明，在加酶量為41mgg、pH值6.2、微波溫度為30

4、℃、微波時間10min的條件下，制備的固定化胰蛋白酶的活力為322.6Ug。此酶在25℃~40℃的溫度范圍內(nèi)、5~7和9~10的pH值范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好，經(jīng)過9次使用后還可以保持63.2%的初始酶活力，在4℃環(huán)境下貯藏五周后仍能保持初始酶活力的64.6%。（2）以ESR5伯氨基樹脂為固定化載體，在微波輔助的條件下，以戊二醛為交聯(lián)劑制備固定化胰蛋白酶。應(yīng)用BoxBehnken響應(yīng)面法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化確定了最佳的固定化條件。結(jié)果表明，在加酶量為

5、26mgg、戊二醛質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.53%、pH值為9.1，微波溫度為35℃、微波時間為5min的條件下，制得的固定化胰蛋白酶的活力為390.8Ug。此酶在25℃~45℃的溫度范圍內(nèi)、在8.5~10.0的pH值范圍內(nèi)酶的穩(wěn)定性較好，經(jīng)過11次使用后還可以保持86.7%的初始酶活力，在4℃環(huán)境下貯藏五周后仍能保持初始酶活力的63.7%。（3）以D151大孔樹脂為固定化載體，在微波輔助的條件下，采用吸附交聯(lián)法制備固定化胰蛋白酶。采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)響應(yīng)