利用分子馬達(dá)技術(shù)對(duì)副溶血性弧菌進(jìn)行快速分型檢測(cè)方法的研究.pdf

1、食源性致病菌是引起食源性疾病的重要因素之一，對(duì)人類健康造成極大的危害，是食品安全的重大隱患。在臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查、食品中微生物檢測(cè)及醫(yī)院感染監(jiān)控等方面，致病菌的分子分型及檢測(cè)是必不可少的內(nèi)容。以受控分子馬達(dá)技術(shù)為核心，集成免疫識(shí)別、熒光探針標(biāo)記與檢測(cè)、陣列微接觸印刷和LED光源編碼控制等技術(shù)，在食源性病原菌分子馬達(dá)檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)上，建立一種快速、高通量的對(duì)同種或同屬食源性致病菌進(jìn)行快速分型檢測(cè)的新方法。
　　本論文首先提取嗜熱

2、菌載色體，熒光探針 F-DHPE標(biāo)記載色體，制備F0F1-ATPase上的ε亞基抗體，并用生物素標(biāo)記N’端，以副溶血性弧菌毒力基因tdh、trh和種特異性基因tlh、toxR為靶基因設(shè)計(jì)4個(gè)探針，并用生物素標(biāo)記5’端，然后將ε亞基抗體與F0F1-ATPase結(jié)合，通過(guò)“生物素-親和素”系統(tǒng)將探針與F0F1-ATPase連接構(gòu)建F0F1-ATPase分子馬達(dá)生物傳感器。
　　提取副溶血性弧菌的DNA，應(yīng)用構(gòu)建的F0F1-ATPase

3、分子馬達(dá)生物傳感器對(duì)其進(jìn)行分型檢測(cè)，一方面，對(duì)種特異性基因 tlh、toxR的檢測(cè)可以對(duì)副溶血性弧菌進(jìn)行檢測(cè)鑒定；另一方面，對(duì)毒力基因tdh、trh的檢測(cè)可以對(duì)副溶血性弧菌是否具有毒性進(jìn)行分型判斷；對(duì)分子馬達(dá)分型檢測(cè)方法進(jìn)行特異性、靈敏度等進(jìn)行了驗(yàn)證，對(duì)載色體添加時(shí)間、熒光素酶添加時(shí)間、反應(yīng)溫度等對(duì)分型檢測(cè)的影響進(jìn)行了研究，對(duì)分型檢測(cè)方法進(jìn)行了優(yōu)化，最終建立了用于副溶血性弧菌致病性快速分子分型的F0F1-ATPase分子馬達(dá)分型鑒定方法