細(xì)胞熒光探針的合成與應(yīng)用.pdf

1、熒光探針作為一類重要的檢測(cè)物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、化工等方面。目前，用于標(biāo)記的熒光探針染料主要有熒光素類、羅明丹類、香豆素類、鄰苯二甲醛類等，其中熒光素及其衍生物一直是生物及化學(xué)分析領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的熒光素類衍生物因其酶解所得熒光素，在水中熒光量子產(chǎn)率較高、摩爾消光系數(shù)高、無毒、成本低，適合于研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)特性及細(xì)胞檢測(cè)等方面。
　　 細(xì)胞是生物體的生命活動(dòng)和形態(tài)結(jié)構(gòu)的基本單位。將熒光探

2、針標(biāo)記活細(xì)胞來研究特定細(xì)胞內(nèi)的屬性，一直是該領(lǐng)域的前沿研究課題。但作為活細(xì)胞標(biāo)記探針必須具備：
　　 (1)探針能特異性與細(xì)胞內(nèi)特定底物結(jié)合；
　　 (2)探針標(biāo)記產(chǎn)物信號(hào)強(qiáng)，可區(qū)分未標(biāo)記細(xì)胞；
　　 (3)探針對(duì)目標(biāo)細(xì)胞無損傷；
　　 (4)背景熒光干擾小，即：熒光產(chǎn)物很少從細(xì)胞內(nèi)滲漏出。熒光素二乙酸酯、氨基熒光素和異硫氰酸酯熒光素等曾用于標(biāo)記活細(xì)胞，但熒光產(chǎn)物的滲漏問題未得到很好的解決。
　　

3、 本論文以熒光素為母體，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，合成了一系列熒光化合物。合成的具有代表性的熒光化合物旨在改善其親脂性和特異選擇性，同時(shí)減少進(jìn)入細(xì)胞后水解熒光素的反滲透，應(yīng)用到細(xì)胞活性的檢測(cè)，優(yōu)化分析條件。主要內(nèi)容如下幾個(gè)方面：
　　 1.綜述了熒光素類探針的研究進(jìn)展及其在細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。
　　 2.合成了熒光素和二氫熒光素，優(yōu)化了二氫熒光素的合成工藝，再對(duì)其酯化。通過單一因素法對(duì)熒光素二乙酸酯(FDA)和二氫熒光素二乙酸酯(

4、H2FDA)的穩(wěn)定性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探索了其穩(wěn)定存在的最佳條件：pH為6-7、溫度為0℃、溶劑為丙酮、濃度為5×10-4g/L。
　　 3.合成了硝基熒光素、氨基熒光素、溴甲基乙酸酯中間體，并對(duì)氨基熒光素進(jìn)行修飾改善其疏水性得到5種氨基熒光素衍生物：5-乙酰胺基熒光素二乙酸酯(AF-DA)、5-琥珀酰胺基熒光素(SAF)、5-丁二酰亞胺基熒光素(SF)、5-琥珀酰胺基熒光素二乙酸酯(SAF-DA)、5-琥珀酰胺基熒光素-乙酰氧基甲酯(