細胞熒光探針的合成與應用.pdf

1、熒光探針作為一類重要的檢測物質(zhì)，廣泛應用于分子生物學、細胞生物學、生物化學、醫(yī)學、化工等方面。目前，用于標記的熒光探針染料主要有熒光素類、羅明丹類、香豆素類、鄰苯二甲醛類等，其中熒光素及其衍生物一直是生物及化學分析領域研究的熱點。進入細胞內(nèi)的熒光素類衍生物因其酶解所得熒光素，在水中熒光量子產(chǎn)率較高、摩爾消光系數(shù)高、無毒、成本低，適合于研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)特性及細胞檢測等方面。
　　 細胞是生物體的生命活動和形態(tài)結(jié)構(gòu)的基本單位。將熒光探

2、針標記活細胞來研究特定細胞內(nèi)的屬性，一直是該領域的前沿研究課題。但作為活細胞標記探針必須具備：
　　 (1)探針能特異性與細胞內(nèi)特定底物結(jié)合；
　　 (2)探針標記產(chǎn)物信號強，可區(qū)分未標記細胞；
　　 (3)探針對目標細胞無損傷；
　　 (4)背景熒光干擾小，即：熒光產(chǎn)物很少從細胞內(nèi)滲漏出。熒光素二乙酸酯、氨基熒光素和異硫氰酸酯熒光素等曾用于標記活細胞，但熒光產(chǎn)物的滲漏問題未得到很好的解決。
　　

3、 本論文以熒光素為母體，對其結(jié)構(gòu)進行修飾，合成了一系列熒光化合物。合成的具有代表性的熒光化合物旨在改善其親脂性和特異選擇性，同時減少進入細胞后水解熒光素的反滲透，應用到細胞活性的檢測，優(yōu)化分析條件。主要內(nèi)容如下幾個方面：
　　 1.綜述了熒光素類探針的研究進展及其在細胞學領域的應用。
　　 2.合成了熒光素和二氫熒光素，優(yōu)化了二氫熒光素的合成工藝，再對其酯化。通過單一因素法對熒光素二乙酸酯(FDA)和二氫熒光素二乙酸酯(

4、H2FDA)的穩(wěn)定性進行實驗，探索了其穩(wěn)定存在的最佳條件：pH為6-7、溫度為0℃、溶劑為丙酮、濃度為5×10-4g/L。
　　 3.合成了硝基熒光素、氨基熒光素、溴甲基乙酸酯中間體，并對氨基熒光素進行修飾改善其疏水性得到5種氨基熒光素衍生物：5-乙酰胺基熒光素二乙酸酯(AF-DA)、5-琥珀酰胺基熒光素(SAF)、5-丁二酰亞胺基熒光素(SF)、5-琥珀酰胺基熒光素二乙酸酯(SAF-DA)、5-琥珀酰胺基熒光素-乙酰氧基甲酯(