RHL抑制2k1c大鼠高血壓及心臟、腎臟纖維化的研究.pdf

1、目的：通過建立兩腎一夾（two-kidney, one-clip:2k1c）腎血管性高血壓大鼠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察2k1c大鼠心臟、腎臟纖維化的情況，探討賴氨大黃酸（RHL）對(duì)2k1c大鼠的高血壓、心臟及腎臟纖維化的作用，并進(jìn)一步闡明RHL抑制大鼠心臟及腎臟纖維化的可能機(jī)制。為RHL降低腎血管性高血壓、抑制心臟和腎臟纖維化的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:1、建造模型：本實(shí)驗(yàn)需要雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠35只，其中2

2、8只采用兩腎一夾的手術(shù)方法來構(gòu)建腎血管性高血壓（RVH）大鼠模型，剩余7只為對(duì)照組（對(duì)照組即為假手術(shù)組）。術(shù)后四周測量各組大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓（SBP），如果 SBP較術(shù)前升高≥20mmHg（1mmHg=0.133kPa），且高于140mmHg為造模成功（共26只造模成功，造模成功率為93.33％）。2實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組6只，從造模成功的26只大鼠中隨機(jī)抽取24只分為模型組、賴氨酸組、大黃酸組和賴氨大黃酸組四組，每組6只。3、在術(shù)后8周處死

3、各組大鼠，并分別提取各組大鼠心臟及腎臟組織。4、檢測：（1）分別測量手術(shù)前、手術(shù)后4周、手術(shù)后8周時(shí)各組大鼠SBP。（2）分別測量各組大鼠的左心室的重量（LVW）、全身重量（BW）、左心室與全身體重的比值（LVW/BW），并提取心臟、腎臟組織進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。（3）應(yīng)用HE染色法觀察各組大鼠心臟及腎臟的病理變化。（4）應(yīng)用Masson三色染色觀察各組大鼠心臟及腎臟纖維組織含量與分布。（5）應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組大鼠心臟及腎臟中TG

4、F-β1和CTGF因子的表達(dá)情況。（6）應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)染色法觀察各組大鼠心臟及腎臟中TGF-β1和CTGF因子的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1、SBP比較結(jié)果：（1）與術(shù)前比較：術(shù)后4周時(shí)的模型組及其它實(shí)驗(yàn)組四組大鼠的 SBP均已上升>40mmHg，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,且高于140mmHg，表明2k1c大鼠高血壓模型建造成功。（2）術(shù)后8周時(shí)各組大鼠SBP比較：模型組與對(duì)照組相比， SBP明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

5、P＜0.05）；賴氨酸組與模型組比較，SBP無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；賴氨大黃酸組與賴氨酸組比較，SBP明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；賴氨大黃酸組與大黃酸組比較，SBP明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2、左心室與全身體重的比值（LVW/BW）比較結(jié)果：模型組與對(duì)照組相比， LVW/BW明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；賴氨酸組與模型組相比， LVW/BW無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、（P＞0.05）；賴氨大黃酸組與賴氨酸組相比，LVW/BW明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；賴氨大黃酸組與大黃酸組相比， LVW/BW稍降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3、HE染色：結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠的心肌及腎臟基本正常，無明顯病理變化；模型組與對(duì)照組相比，大鼠心臟及腎臟可觀察到纖維化程度增加；賴氨酸組與模型組相比，大鼠心臟及腎臟纖維化程度無明顯變化；賴氨大黃酸組與賴氨酸組的比較，心臟及腎臟纖維化程度有所減輕。賴氨大

7、黃酸組與大黃酸組相比，心臟及腎臟纖維化程度有所減輕。4、Masson三色染色：模型組與對(duì)照組比較，大鼠心臟及腎臟組織中纖維含量顯著增多（P＜0.05）；賴氨酸組與模型組比較，大鼠心臟及腎臟組織纖維含量無明顯差別（P＞0.05）；經(jīng)RHL治療后，大鼠心臟及腎臟組織中纖維含量顯著減少（P＜0.05）；與大黃酸組比較，RHL組較大黃酸組纖維含量明顯減少（P＜0.05）。5、免疫組織化學(xué)染色：結(jié)果顯示，對(duì)照組的心臟及腎臟的TGF-β1及CTGF

8、輕微表達(dá)；模型組與對(duì)照組比較，大鼠心臟及腎臟的TGF-β1及CTGF表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）；賴氨酸組與模型組比較，大鼠心臟及腎臟的TGF-β1及CTGF的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）；賴氨大黃酸組與賴氨酸組比較，大鼠心臟及腎臟TGF-β1及CTGF表達(dá)明顯減輕（P＜0.05）；賴氨大黃酸組與大黃酸組比較，大鼠心臟及腎臟TGF-β1及CTGF表達(dá)明顯減輕（P＜0.05）。6、免疫熒光組織化學(xué)染色：結(jié)果顯示，對(duì)照組的心臟及腎臟的TGF-

9、β1及CTGF輕微表達(dá)；模型組與對(duì)照組比較，大鼠心臟及腎臟的TGF-β1及CTGF表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）；賴氨酸組與模型組比較，大鼠心臟及腎臟的TGF-β1及CTGF的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）；賴氨大黃酸組與賴氨酸組比較，大鼠心臟及腎臟TGF-β1及CTGF表達(dá)明顯減輕（P＜0.05）；賴氨大黃酸組與大黃酸組比較，大鼠心臟及腎臟TGF-β1及CTGF表達(dá)明顯減輕（P＜0.05）。
　　結(jié)論:12k1c高血壓大鼠模型建造成功