血小板在高血壓致炎癥和心臟纖維化中的作用的研究.pdf

1、目的：血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ)微量泵灌注模擬高血壓進(jìn)而導(dǎo)致心臟纖維化的模型，通過血壓檢測(cè)及心臟病理染色觀察確定心臟纖維化模型制備成功；在血管緊張素Ⅱ灌注致心臟纖維化模型的基礎(chǔ)上，通過抑制血小板及降低血壓，驗(yàn)證在心臟纖維化過程中，血管緊張素Ⅱ及其引起的血壓升高，導(dǎo)致內(nèi)皮的損傷，活化血小板，引起一系列炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致心臟纖維化。
　　 方法：(1)將10只野生C57BL吡6小鼠隨機(jī)分為兩組，分別給予血管緊張素Ⅱ(1

2、000ng/kg*min，7d)及乙酸溶液(溶劑對(duì)照sham組)微量泵灌注，在灌注前3天及第4-7天通過小鼠尾動(dòng)脈套法測(cè)定血壓，確定高血壓模型制備成功。在灌注第7天，取材，masson染色觀察兩組小鼠心臟纖維化程度。(2)將15只野生C57BL/6小鼠隨機(jī)分為3組，在血管緊張素Ⅱ微量泵灌注(angiotensinⅡ1000ng/kg*min,7d)致心臟纖維化模型的基礎(chǔ)上，我們分別給予氯吡格雷(clopidogrel50mg/kg*d灌

3、胃給藥)以抑制血小板，肼苯達(dá)嗪(hydralazine50mg/kg*d飲用水給藥)以降低血壓，血壓測(cè)定確定高血壓模型制備成功，小鼠超聲心動(dòng)圖檢查以觀察對(duì)小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響，masson染色觀察心臟纖維化程度，HE染色及免疫組化Mac-2染色觀察心臟組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度，免疫組化α-sma(α-平滑肌肌動(dòng)蛋白)染色觀察心臟組織中肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast)的形成。
　　 結(jié)果：(1)在對(duì)野生C57BL/6小

4、鼠給予血管緊張素Ⅱ微量泵灌注(angiotensinⅡ1000ng/kg*min，7d)第4天，實(shí)驗(yàn)組小鼠血壓開始上升，至灌注結(jié)束第7天，實(shí)驗(yàn)組小鼠血壓相比sham組明顯升高。masson染色觀察，實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟組織中在血管周圍及心肌間質(zhì)都出現(xiàn)明顯纖維化，而sham組小鼠則無纖維化出現(xiàn)。(2)與血管緊張素Ⅱ灌注(angiotensinⅡ1000ng/kg*min，7d)組相比，氯吡格雷組小鼠血壓開始升高，肼苯達(dá)嗪組則無明顯升高，至血管緊

5、張素Ⅱ灌注第7天，氯吡格雷組小鼠血壓相比對(duì)照組無差別，肼苯達(dá)嗪組小鼠血壓則低于對(duì)照組。小鼠心臟超聲心動(dòng)圖檢查示，僅肼苯達(dá)嗪組小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)(EF％)高于對(duì)照組(70.05±9.65 vs49.01±10.22，p＜0.05)，其余指標(biāo)分析無差別。masson染色示氯吡格雷組小鼠心臟纖維化程度相比對(duì)照組減輕，肼苯達(dá)嗪組小鼠心臟纖維化程度相比對(duì)照組明顯減輕，HE染色示氯吡格雷組及肼苯達(dá)嗪組小鼠心臟組織中的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，均明顯低于對(duì)照組。免

6、疫組化Mac-2染色示氯吡格雷組及肼苯達(dá)嗪組小鼠心臟組織中Mac-2陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)均明顯低于對(duì)照組。α-sma作為肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)記物，顯示處理組小鼠心臟組織中α-sma陽(yáng)性的肌成纖維細(xì)胞低于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：經(jīng)血管緊張素Ⅱ微量泵灌注，成功構(gòu)建了高血壓致心臟纖維化小鼠模型。在心臟纖維化中，抑制血小板聚集及降低血壓，可以減少心臟組織的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，尤其是Mac-2陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞局部浸潤(rùn)，減少心臟組織中α-sma陽(yáng)性的肌成