自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌和纖維化腎臟組織中microRNA-21的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 心血管疾病在發(fā)達(dá)國(guó)家長(zhǎng)期以來(lái)一直是主要的死因，而且正快速變?yōu)榘l(fā)展中國(guó)家的頭號(hào)殺手。許多諸如高血壓，缺血性心臟病，血管疾病，和內(nèi)分泌紊亂的心血管疾病的常見(jiàn)的病理反應(yīng)是心肌肥大。因此心肌肥大是心血管疾病致死率和病態(tài)的主要的一個(gè)決定因素。
　　 心臟的病理過(guò)程和對(duì)心臟功能重要的基因的表達(dá)譜有關(guān)，MicroRNAs是最近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)調(diào)控基因表達(dá)的內(nèi)源性非編碼的小RNAs.它們的生物重要性，起初在癌癥，病毒疾病和發(fā)育過(guò)

2、程被證實(shí)，最近在心血管生理和病理方面更多的被調(diào)查
　　 在心臟方面，microRNAs單獨(dú)或者聯(lián)合的錯(cuò)誤表達(dá)影響細(xì)胞結(jié)局，調(diào)節(jié)細(xì)胞增長(zhǎng)和分化之間的平衡，并且誘導(dǎo)或者影響心臟疾病狀態(tài)，諸如肥大，纖維化，電重塑和心律失常。
　　 好幾種MicroRNAs的上調(diào)或者下調(diào)與嚙齒類(lèi)和人類(lèi)病理性的心臟重塑有關(guān)，其中miR-1，miR-195，miR-21，miR-133和心臟增長(zhǎng)方面的作用有關(guān)。研究最熱的是MiR-21。許多研究得出

3、一致性的結(jié)果MiR-21在肥大心臟中的表達(dá)上調(diào)。
　　 本研究應(yīng)用病理切片染色、real-time PCR等技術(shù)觀察SHR大鼠和Wistar大鼠心臟及腎臟組織中miR-21的表達(dá)情況，探討miR-21在高血壓致左室肥厚及腎臟纖維化中的作用。
　　 方法：
　　 一、模型制備
　　 選擇10只11周齡雄性SPF級(jí)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）作為實(shí)驗(yàn)組，年齡性別相配的10只SPF級(jí)Wistar大鼠為對(duì)照組。所有

4、大鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，后實(shí)驗(yàn)組大鼠予以0.45％的氯化鈉溶液飼養(yǎng)三周，對(duì)照組大鼠正常飲用自來(lái)水。所有大鼠均于飼養(yǎng)四周后處死。立即取腎臟及左室心肌組織于-80℃凍存?zhèn)溆谩?br>　　 二、心臟肥大和腎臟纖維化的評(píng)估
　　 通過(guò)心臟大小的組織病理學(xué)的分析，左心室重量指數(shù)（LNMI）即左心室重與體重的比值（LVW：BW）來(lái)評(píng)估心肌肥大。通過(guò)組織病理學(xué)的分析來(lái)評(píng)估腎臟纖維化。
　　 三、miRNA檢測(cè)
　　 1、提取m

5、iRNA
　　 2、檢測(cè)miRNA.溶液濃度和純度（OD260/280）。
　　 3、加Poly（A）尾
　　 4、反轉(zhuǎn)錄
　　 5、PCR反應(yīng)
　　 結(jié)果：
　　 1、心肌肥大和腎臟纖維化的鑒定
　　 計(jì)算出兩組左心室重量指數(shù)（LVMI），實(shí)驗(yàn)組LNMI高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于15周齡時(shí)處死，同時(shí)病理檢測(cè)其心肌組織及腎臟組織病理改變。光鏡下可

6、見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)組左室心肌細(xì)胞明顯肥大，左室心肌及腎臟近髓皮質(zhì)部組織顯著纖維化改變。對(duì)照組左室心肌細(xì)胞未見(jiàn)肥大的改變，心肌纖維化和腎臟纖維化程度較輕。
　　 2、肥大心臟和纖維化腎臟microRNA-21的表達(dá)
　　 實(shí)驗(yàn)組大鼠microRNA-21在左室心肌和腎臟近髓皮質(zhì)部組織的表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 在SHR大鼠肥大的左心室和纖維化的腎臟近髓皮質(zhì)部組織中miR-21是相對(duì)高度