桂花DAD-1同源基因片段的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、分類號(hào):密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文桂花刃以D一I同源基因片段的克隆及表達(dá)分析CloningandanalysisofPartialfragmentofl)ID一1homologueGenefromOsmanthus戶只grans碩士研究生:陸玲指導(dǎo)教師:王彩云教授指導(dǎo)小組:宋從文研究員胡惠蓉副教授劉國鋒副教授張俊衛(wèi)副教授寧國貴副教授專業(yè):園林植物與觀賞園藝獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:園林植物栽培生理授予學(xué)位日期:2009年6月華中

2、農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院二00九年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文2.2.2.3.1Aclin基因PCR擴(kuò)增........................................................................……212.2.2.3.2DAD一1基因巢式PCR擴(kuò)增...............................……，.......................……222.2.2.3.3R

3、ealTimePCR...................................................……，.......................……222.2.2.4PCR產(chǎn)物檢測......……，................................................................................……232.2.2.5PCR產(chǎn)物的回收..……‘..

4、..............................................................................……232.2.2.6回收片段的連接.……，................................................................................……232.2.2.7連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化......................

5、..................................................................……242.2.2.8連接產(chǎn)物的鑒定........................................................................................……242.2.2.9測序...................................

6、.........................................................................……242.2.2.10克隆片段序列及分析...............................................................................……243.結(jié)果與分析....................................

7、............................……，.........................................................……253.1桂花花瓣總RNA提取結(jié)果............................……，...............……253.2桂花Actin基因和刀月D一了同源基因的克隆結(jié)果與分析.................................

8、..............……263.2.IR下PCR產(chǎn)物……，..................................……‘.........................................................……263.2.1.1Actin基因Rl’PCR產(chǎn)物...................................................................

9、..........……263.2.1.2幾理D一l同源基因Rl’PCR產(chǎn)物..……‘..................................................……，……263.2.2克隆片段的回收、轉(zhuǎn)化及鑒定............................................................................……273.2.2.1Actin基因片段的回收、轉(zhuǎn)化

10、及鑒定........................................................……273.2.2.2DAD一I基因片段的回收、轉(zhuǎn)化及鑒定..............................................……‘……283.2.3序列測定結(jié)果及分析..........................……，................，……283.2.3.1Acti。基因序

11、列分析.....................................................……283.2.3.2D月D一了序列分析..........................................................……303.3D月D一了在不同時(shí)期花瓣中的表達(dá)差異檢測...........................................................

12、.......……334.結(jié)論與討論...........................................................................................................................……、……344.1桂花花瓣總RNA的提取....................................................……344.

13、2PcR體系和程序..................................................................……344.3桂花Acti。基因的克隆.......................................................……354.4桂花刀月D一了同源基因片段的克隆................................................

14、................................……364.4.1桂花D月刀刁基因同源片段的獲得.，....................................................................……364.4.2不同植物刀月D一I基因的親緣關(guān)系比較..............................................................……364

15、.5不同時(shí)期花瓣及咬刀刁荃因的表達(dá)分析.............……，.....……，.......................................……374.6本實(shí)驗(yàn)存在的不足與今后研究展望...............................................................................……37參考文獻(xiàn).............................

16、........................................................……，.............................................……39致謝..................................................................……，.........................................

17、.................……，.……，.45附錄........................................................................................……，...........................……，...........……46附錄1.常用緩沖液、溶液及培養(yǎng)基的配制二，..................................

18、..................................……46附錄2.RNA酶活勝的滅除方法...........................，……46附錄3.基因信息...............……，.......................................................................................……47附錄4.pMD18一T載體信息…，.