大豆NBS類抗病基因同源片段的克隆及遺傳轉化的初步研究.pdf

1、大豆不僅是重要的高蛋白飼料與油料作物，在我國更是一種傳統(tǒng)的美食，其豐富多樣的豆類食品深受人們的喜愛，成為大眾生活中必不可缺的重要食物。歷來多種病蟲害嚴重地影響了大豆的品質與產量，加之外來轉基因大豆大量入侵使得我國本土大豆工業(yè)面臨了巨大的挑戰(zhàn)。NBS類抗病基因在植物抗病基因組中含量較多而且具有保守的結構域，為其從大豆中克隆出這類抗病基因提供了可能，從抗病性強、蛋白高的地方大豆中克隆出抗病基因轉入其他基因型品種對于研究NBS結構域的功能及抗

2、病機理、抗病基因的連鎖定位、大豆抗病育種有重要的意義。研究結果如下：
　　1. NBS類抗病基因同源片段的克?。焊鶕共』虮Ｊ亟Y構域設計3對簡并引物通過RT-PCR，從湖南黑豆與福建黑豆的cDNA中擴增出100多個克隆，測序鑒定出2個有通讀閱讀框并且具有NBS結構域的片段：FNBS1、FNBS3。FNBS1大小為534bp，編碼181個氨基酸，包含P—loop、kinase--2、HD等結構域；FNBS3大小為513bp，編碼1

3、69個氨基酸，包含P—loop、HD等結構域，2個片段均具有NB-ARC結構域（在植物中與抗病有關），FNBS1與大豆抗病蛋白RPM1同源性為97%，FNBS3與大豆抗TMV蛋白的同源性為99%。
　　2.農桿菌介導大豆轉化體系的優(yōu)化：本實驗研究了不同基因型、不同的器官、抗氧化劑等因素對遺傳轉化的影響，對大豆的轉化體系進行了優(yōu)化。通過對3個不同基因型的叢芽發(fā)生能力的比較發(fā)現湖南青豆的叢芽率最高達到60%，平均叢芽發(fā)生能力大于3；對

4、比福建青豆不同的器官發(fā)現子葉節(jié)的叢芽率最高達到35%；在研究抗氧化劑對轉化效率影響的實驗中發(fā)現，添加適量的抗氧化劑能明顯提高GUS瞬間表達率，從15.2%顯著提高到40.8%，而且能有效地抑制浸染過程外植體傷口處的褐化與組織的死亡。
　　3.大豆 NBS類抗病基因同源片段的遺傳轉化：構建了植物表達載體pFGC5941-NBS，通過農桿菌介導轉化大豆與煙草，得到了大豆轉基因陽性苗2株，轉化率為1.08%，得到煙草轉基因陽性苗15株，